[發(fā)明專利]在8-9月份基于短截枝條獲取外植體以提高碭山酥梨組培苗成活率的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610189335.1
• 申請(qǐng)日: 2016-03-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105766643B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔡永萍;張金云;程曦;金青;李姝妹;馬晨輝;熊鷹;孫寧;閆沖沖;李國(guó)慶;程俊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00;A01G2/30
• 代理公司: 合肥興東知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34148
• 代理人: 王偉

一種在8?9月份基于短截枝條獲取外植體以提高碭山酥梨組培苗成活率的方法，該方法是在8?9月份，選擇樹(shù)齡20年以內(nèi)的梨樹(shù)，并選擇生長(zhǎng)健壯無(wú)病蟲(chóng)害一年生的背上枝或徒長(zhǎng)枝，在其芽體飽滿充實(shí)處進(jìn)行短截，誘發(fā)梨植株在剪口下萌發(fā)新梢，待新梢生長(zhǎng)8㎝～10㎝時(shí)，剪下該新梢作為組培外植體；外植體經(jīng)消毒、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖分化培養(yǎng)、接穗培養(yǎng)和嫁接等步驟獲得碭山酥梨種苗。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，操作容易，不增加其他成本；根據(jù)組培計(jì)劃，需要多少外植體，就提前處理多少枝條。在8?9月份可以通過(guò)本發(fā)明方法獲得充足的碭山酥梨再生植株，滿足利用基因工程進(jìn)行種質(zhì)改良研究或碭山酥梨規(guī)模化種苗繁殖等；且本發(fā)明組培方法成活率達(dá)96％以上。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種梨組織培養(yǎng)的外植體獲取的方法，具體說(shuō)是一種在8-9月份基于短截枝條獲取外植體以提高碭山酥梨組培苗成活率的組培方法。

背景技術(shù)

碭山酥梨原產(chǎn)安徽省碭山縣，至今有2000多年的歷史。碭山酥梨耐鹽堿、耐瘠薄、耐貯藏、酥脆多汁等等綜合性狀優(yōu)良，至今無(wú)其他品種替代。目前，僅碭山酥梨這一個(gè)品種的栽培面積仍占全國(guó)梨生產(chǎn)總面積20％以上，但在長(zhǎng)期的無(wú)性繁殖過(guò)程中，感染并積累了多種病毒，嚴(yán)重影響梨果的產(chǎn)量和質(zhì)量；隨著分子生物學(xué)領(lǐng)域技術(shù)迅猛發(fā)展，利用基因工程進(jìn)行種質(zhì)改良研究也進(jìn)一步深入。無(wú)論是種苗脫毒純化或利用基因工程進(jìn)行種質(zhì)改良研究等，都需要進(jìn)行大量的碭山酥梨組織培養(yǎng)，而外植體的選擇是組織培養(yǎng)的第一步，選材的部位、時(shí)期等都會(huì)影響到外植體的成活率。梨的組織培養(yǎng)分為莖尖培養(yǎng)、莖段培養(yǎng)、胚培養(yǎng)、花藥培養(yǎng)和葉片培養(yǎng)，考慮到成活率、取材是否容易以及生產(chǎn)成本等諸多因素，目前在梨的組織培養(yǎng)中應(yīng)用比較廣泛的是采取旺盛生長(zhǎng)的新梢作為外植體，取其莖尖作接種材料培養(yǎng)，由于此期外植體的酚類物質(zhì)積累較少，多酚氧化酶活性弱，外植體不容易褐化，成活率最高。

碭山酥梨是落葉果樹(shù)，具有符合自身特性的品種物候期，其新梢旺盛生長(zhǎng)期一般在4月上旬至5月上旬，到6月中旬基本停止生長(zhǎng)，并且碭山酥梨枝條很少有自然第二次再抽生新梢的現(xiàn)象。因此，在生產(chǎn)上或?qū)嶒?yàn)室所需組培，一般只能在每年的4月上旬至5月上旬能獲得大量?jī)?yōu)良外植體，滿足當(dāng)季組培需要。而碭山酥梨在組培時(shí)增殖倍數(shù)較低，一般不超過(guò)3倍，并且最多繼代培養(yǎng)6代，否則影響其生長(zhǎng)勢(shì)和成活率。也因此，無(wú)論利用基因工程進(jìn)行種質(zhì)改良研究或碭山酥梨規(guī)?；N苗繁殖等，不能周年提供足夠的組培苗嚴(yán)然已成為產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸。

本項(xiàng)目組經(jīng)10余年反復(fù)試驗(yàn)研究，終于獲得一種方法，能在8-9月份獲得大量的組培外植體，不增加成本，操作容易，并且能提高碭山酥梨組培苗成活率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種在8-9月份以短截枝條獲取碭山酥梨外植體，并基于該外植體提高碭山酥梨組培苗成活率的組培方法。

本發(fā)明解決技術(shù)問(wèn)題采用如下技術(shù)方案：

在8-9月份基于短截枝條獲得碭山酥梨組培苗的方法，其特征在于，在8-9月份，選擇樹(shù)齡在20年以內(nèi)的梨樹(shù)，并選擇生長(zhǎng)健壯無(wú)病蟲(chóng)害一年生的背上枝或徒長(zhǎng)枝，在芽體飽滿充實(shí)處進(jìn)行短截，誘發(fā)梨植株在剪口下萌發(fā)新梢，待新梢生長(zhǎng)8㎝～10㎝時(shí)，剪下該新梢即得組培外植體。

本發(fā)明同時(shí)提供一種在8-9月份基于短截枝條獲取外植體以提高碭山酥梨組培苗成活率的方法，包括外植體獲得與消毒及預(yù)處理、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖分化培養(yǎng)、接穗培養(yǎng)和嫁接，其特點(diǎn)在于，

所述外植體獲得是指：在8-9月份，選擇樹(shù)齡在20年以內(nèi)的梨樹(shù)，并選擇生長(zhǎng)健壯無(wú)病蟲(chóng)害一年生的背上枝或徒長(zhǎng)枝，在其芽體飽滿充實(shí)處進(jìn)行短截，誘發(fā)梨植株在剪口下萌發(fā)新梢，待新梢生長(zhǎng)8㎝～10㎝時(shí)，剪下該新梢即得組培外植體。