[發明專利]在8-9月份基于短截枝條獲取外植體以提高碭山酥梨組培苗成活率的方法

有效

• 申請號: 201610189335.1
• 申請日: 2016-03-28
• 公開（公告）號: CN105766643B
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發明（設計）人: 蔡永萍;張金云;程曦;金青;李姝妹;馬晨輝;熊鷹;孫寧;閆沖沖;李國慶;程俊
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G2/30
• 代理公司: 合肥興東知識產權代理有限公司 34148
• 代理人: 王偉

1.在8-9月份基于短截枝條獲取外植體以提高碭山酥梨組培苗成活率的方法，包括外植體獲得與消毒及預處理、誘導培養、增殖分化培養、接穗培養和嫁接，其特征在于，

所述外植體獲得是指：在8-9月份，選擇樹齡在20年以內的梨樹，并選擇生長健壯無病蟲害一年生的背上枝或徒長枝，在其芽體飽滿充實處進行短截，誘發梨植株在剪口下萌發新梢，待新梢生長8㎝～10㎝時，剪下該新梢即得組培外植體；

所述外植體的消毒是指：將外植體用洗衣粉浸泡30min后再用流水沖洗1h，然后先放入以W/V計6％Vc溶液中浸泡15min，并不斷振蕩，再置于超凈工作臺上，用以V/V計75％的酒精溶液消毒25s，再用無菌水沖洗3次后用以V/V計0.1％的HgCl₂溶液浸泡5～7min，所述的HgCl₂溶液每500mL添加有200μL吐溫-80，最后用無菌水沖洗3次，進行外植體預處理；所述外植體預處理是指用經滅菌處理過的剪刀將外植體剪成2cm～3cm的小段，每段帶有一個腋芽或者頂芽，之后用無菌濾紙吸干附著在表面的水分，等待接入誘導培養基；

所述誘導培養是指，將預處理后的外植體形態學下端向下接入誘導培養基上，于25±1℃、光照1500Lx～2500Lx；光照時間為12h～16h/d的條件下培養25d～30d，得到分化出芽叢的試管苗；所述誘導培養基配方為MS+1.5～2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+0.2～0.6％AC+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂，pH值為5.8～6.0；

所述增殖分化培養是指：將誘導培養得到的分化出芽叢的試管苗在繼代培養基中培養，促使腋芽和不定芽的萌生，形成大量芽叢，通過將芽叢分割而達到擴繁的目的，所述繼代培養基為：MS+1.0～1.5mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA+80mg/L PG；繼代增殖分化培養每代間隔時間為28d～35d，最多繼代培養6代；

所述接穗培養是指：將分化出芽叢的試管苗分割，再逐個芽接入接穗培養基中，于25±1℃、光照1500Lx～2500Lx、光照時間為12h～16h/d的條件下培養30d～35d，使試管苗具有5～7片葉時即可進行嫁接，所述接穗培養基為1/4MS+80mg/L PG+0.5～1.0mg/L IBA+0.3mg/L NAA+0.3mg/L K₂HPO₄+0.1mg/L CaCL₂；

所述嫁接是指：

A、嫁接前煉苗，開瓶，光線由弱漸強，使其試管苗逐漸適應外界環境，然后貼近接穗培養基將試管苗上部全部剪切下來即可作為接穗；

B、嫁接時，將砧木苗從離根莖部3㎝～8㎝處橫向切斷，再沿著橫斷面縱切一刀，根據接穗和砧木的粗細可適當調整縱切位置，若接穗和砧木一樣粗或接穗粗于砧木，沿著橫斷面中部縱切一刀，若接穗粗度細于砧木，沿著橫斷面偏向一側縱切一刀；然后迅速將接穗楔形部位插入切口，一定要將接穗與砧木一側韌皮部對齊；最后將接口部位用封口膜纏緊，再用塑料薄膜袋罩上扎嚴，后期按常規技術管理即可。