[發明專利]血清中DCD的Elisa檢測方法在審
| 申請號： | 201610187336.2 | 申請日： | 2016-03-28 |
| 公開（公告）號： | CN105652020A | 公開（公告）日： | 2016-06-08 |
| 發明（設計）人： | 邱芳華;薛志鋒;梁東艷 | 申請（專利權）人： | 廣州市中醫醫院 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288 | 代理人： | 秦維 |
| 地址： | 510000*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 血清 dcd elisa 檢測 方法 | ||
1.血清中DCD的Elisa檢測方法，包括以下步驟：
1)配制標準溶液：取標準樣品，加稀釋緩沖液配制一組梯度濃度的標準溶 液；
2)取樣：將DCD抗體預包被于孔板；分別取標準溶液和血清樣本加至板孔 后依次加入生物素標記抗體；取TMB顯色液加入板孔作為對照孔；孔板加上蓋， 反應；
3)加含HRP的親和素：加入洗滌液洗滌，將含HRP的親和素加入除對照 孔以外的板孔，反應；
4)顯色檢測：加入洗滌液洗滌，加入TMB顯色液，反應；加入TMB終止 液；酶標儀在450nm測定O.D.值；以濃度為橫坐標、以步驟1)的標準溶液的 O.D.值為縱坐標作標準曲線；
5)計算濃度：通過標準曲線計算血清樣本中DCD的濃度。
2.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，DCD抗體的獲得方法如下： 向成年小鼠或大鼠以0.1-0.5mL/kgb.w.的劑量皮下注射DCD進行免疫，第5天 以同樣的劑量再次免疫，第15天收集存活小鼠或大鼠的血清，凝膠電泳分離出 DCD抗體。
3.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述洗滌液為質量分數為 10-20％的吐溫水溶液。
4.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟1)中，所述稀釋緩 沖液為PBS緩沖液或Tris-HCl緩沖液。
5.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟2)中，血清樣本是 經稀釋緩沖液稀釋1-100倍的血清樣本。
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