[發明專利]ITS序列作為DNA條形碼在鑒定嘉興槜李中的應用及鑒定方法

有效

• 申請號: 201610186877.3
• 申請日: 2016-03-29
• 公開（公告）號: CN105671185B
• 公開（公告）日: 2019-02-05
• 發明（設計）人: 李軍;李白;李斌
• 申請（專利權）人: 浙江省嘉興市農業科學研究院（所）
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 沈自軍

本發明公開了ITS序列作為DNA條形碼在鑒定嘉興槜李中的應用及鑒定方法，屬于分子鑒定技術領域。所述鑒定方法包括：利用PCR擴增待測樣品的ITS序列并進行測序，如果ITS序列的165bp堿基為“T”、195bp堿基為“T”，則判定待測樣品為嘉興槜李。本發明還公開了一種鑒別嘉興槜李早熟品種和晚熟品種的方法，如果ITS序列的堿基序列如SEQ ID NO.1所示，則判定待測樣品為嘉興槜李早熟品種；如果ITS序列的堿基序列如SEQ ID NO.2所示，則判定待測樣品為嘉興槜李晚熟品種。本發明利用ITS序列作為DNA條形碼鑒定嘉興槜李，檢測準確性高、可重復性高，鑒定時間短。

技術領域

本發明涉及分子鑒定技術領域，尤其涉及ITS序列作為DNA條形碼在鑒定嘉興槜李中的應用及鑒定方法。

背景技術

槜李(Prunus salicina Lindl.)是薔薇科(Rosaceae)李屬(Prunus L.)植物，是浙江省嘉興市特產，也是浙江省傳統名果。槜李品質細膩鮮潤，完熟時能化成甘甜略帶酒香的漿液，風味品質極佳，是夏季消費者喜愛的優質水果之一。目前除浙江嘉興的桐鄉、海寧、海鹽、湖州等地有槜李栽培外，在江蘇省和安徽省也有少量引種。

槜李多采用嫁接繁殖，在不同栽培區域進行引種嫁接，極易造成同名異物及同物異名的現象。另外槜李受不同栽培管理方法、土壤及氣候條件的影響，果實在成熟期的生物學特性及品質外觀方面呈現一定的差異，市場上魚目混珠給消費者帶來極大困惑。

傳統的植物分類方法是借助于對植物形態構造、生活習性等進行比較研究，隨著科技的不斷進步，植物分類方法逐步發展到分子生物學方法。目前，尚無關于嘉興槜李分子鑒定的文獻報道，關于槜李的研究多集中在栽培及低坐果率方面。由于槜李的果實外觀受不同栽培管理方法、土壤及氣候條件的影響，果實色澤往往不同，僅僅依靠果實形態來區分槜李與其他品種李難度較大，依靠傳統的形態分類學方法在嘉興槜李的鑒別上存在局限性。鑒于嘉興槜李在地方特產及農業領域的重要地位，針對嘉興槜李建立一套可靠的分子鑒別方法勢在必行，對于嘉興槜李的種質資源保護具有重要意義。

DNA條形碼(DNA barcoding)技術是利用標準的、具有足夠變異的、易擴增且相對較短的DNA片段在物種內的特異性和物種間的多樣性而創建的一種新的生物身份識別系統，可實現對物種的快速自動鑒定。該技術已被成功應用于生物物種分類和鑒定等領域，并成為進展最迅速的學科前沿之一。

DNA條形碼技術研究中常用的DNA序列有matK、trnH-psbA、rbcL和ITS等。核基因組的ITS區位于18S和26S rRNA基因之間，被5.8S rRNA基因分為兩段，即ITS1和ITS2，是核糖體DNA(nrDNA)轉錄單位的一部分。在被子植物中，ITS區具有長度保守性和核苷酸序列的高度變異性，使得這些間隔區的DNA序列較為容易排序，而高度變異性可以為重建較低分類階元的系統發育提供分子證據。ITS序列區間已經廣泛地應用于植物分類、起源、進化等方面的研究。

現有研究報道中，王化坤等選擇桃、李、梅、杏、櫻桃各2～4個主要種或變種共16個基因型測定其ITS序列，與從GenBank下載的6個核果類果樹ITS序列形成了較為全面的數據矩陣。采用二次置根法用櫻桃置根，用PAUP軟件計算數據集在56個進化模型的得分，Modeltest篩選最佳模型和參數，計算遺傳距離、變異，用最大簡約法構建了桃、李、梅、杏、櫻桃的系統發育樹。

發明內容

本發明通過實驗研究發現嘉興槜李的ITS序列的第165位和第195位的堿基與其他品種存在差異，基于以上發現，本發明提供了ITS序列作為DNA條形碼在鑒定嘉興槜李中的應用。

ITS序列作為DNA條形碼在鑒定嘉興槜李中的應用，所述ITS序列的堿基序列如SEQID NO.1或SEQ ID NO.2所示。

嘉興槜李早熟品種的ITS序列如SEQ ID NO.1所示，晚熟品種的ITS序列如SEQ IDNO.2所示。