[發明專利]一種多肽化衍生方法及其在MALDI?TOF?MS檢測小分子化合物中的應用

有效

• 申請號: 201610185724.7
• 申請日: 2016-03-29
• 公開（公告）號: CN105699476B
• 公開（公告）日: 2018-03-13
• 發明（設計）人: 馮鈺锜;袁必鋒;唐峰
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙)42222
• 代理人: 張火春

1.一種多肽化衍生小分子化合物結合MALDI-TOF-MS的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)多肽化衍生小分子化合物：將醛類化合物、多肽P2以摩爾比為20～100：1加入到pH為4～6的磷酸緩沖溶液中，25～37℃下，發生脫水縮合反應，1～10h；多肽P2的氨基酸序列如SEQ NO.1所示，N端修飾半胱氨酸，作為醛類物質的衍生化試劑；

(2)MALDI-TOF-MS分析：樣品衍生化完成后，按照1μL樣品液混合1μL基質α-氰基-4-羥基肉桂酸CHCA點板，室溫風干后進入基質輔助激光解析電離-飛行時間質譜，采用正離子反射模式分析。

2.根據權利要求1所述的多肽化衍生小分子化合物結合MALDI-TOF-MS的方法，其特征在于，步驟(1)中醛類化合物、多肽P2以摩爾比為50：1加入到pH為4的磷酸緩沖溶液中，25℃下，發生脫水縮合反應，5h。

3.一種多肽化衍生小分子化合物結合MALDI-TOF-MS的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)多肽化衍生小分子化合物：將巰基類化合物、多肽P7以摩爾比為2～10：1加入到pH為5～7的磷酸緩沖溶液中，4～37℃下，發生點擊化學反應，0.2～2h；多肽P7的氨基酸序列如SEQ NO.2所示，Lys上修飾馬來酰亞胺，作為巰基類物質的衍生化試劑；

(2)MALDI-TOF-MS分析：樣品衍生化完成后，按照1μL樣品液混合1μL基質α-氰基-4-羥基肉桂酸點板，室溫風干后進入基質輔助激光解析電離-飛行時間質譜，采用正離子反射模式分析。

4.根據權利要求3所述的多肽化衍生小分子化合物結合MALDI-TOF-MS的方法，其特征在于，步驟(1)中巰基類化合物、多肽P7以摩爾比為5：1加入到pH為6的磷酸緩沖溶液中，4℃下，發生點擊化學反應，0.5h。

5.一種多肽化衍生結合MALDI-TOF-MS的定量分析方法，其特征在于，將小分子待測物按照權利要求1～4任一項所述的方法多肽衍生化后，與相應的穩定同位素內標1：1混勻，按照1μL待測液混合1μL基質點板；室溫風干后進入基質輔助激光解析電離-飛行時間質譜分析，根據目標分析物譜峰強度與穩定同位素譜峰強度的比值對其進行定量分析；所述的穩定同位素內標由穩定同位素多肽衍生化試劑與過量的小分子待測物進行衍生化反應后，真空冷凍旋干除去過量的小分子，再復溶于水中制成。

6.權利要求1-5任一項所述的方法在代謝組學分析領域中的應用。