[發(fā)明專利]微囊化免疫細(xì)胞凍存與復(fù)蘇方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610184699.0
• 申請(qǐng)日: 2016-03-29
• 公開（公告）號(hào): CN105746493A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾憲卓;曾明哲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳愛生再生醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02;C12N5/0783
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• 代理人: 暫無信息

1.一種微囊化免疫細(xì)胞凍存方法，其特征在于，包括以下步驟：

獲取免疫細(xì)胞；

將所述免疫細(xì)胞與用于制作微囊的囊材混合進(jìn)行微囊化處理，獲得微囊化免疫細(xì)胞；

將所述微囊化細(xì)胞置于細(xì)胞凍存液中進(jìn)行凍存。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微囊化免疫細(xì)胞凍存方法，其特征在于，所述囊材為殼聚糖或海藻酸-聚賴氨酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的微囊化免疫細(xì)胞凍存方法，其特征在于，所述囊材為海藻酸-聚賴氨酸，且所述微囊化處理的過程包括以下步驟：

將所述免疫細(xì)胞和海藻酸溶液混合攪拌至免疫細(xì)胞濃度為(0.5～2)×10⁷個(gè)/ml，逐滴加入氯化鈣溶液中，形成凝膠球后，加入聚賴氨酸包埋。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的微囊化免疫細(xì)胞凍存方法，其特征在于，所述聚賴氨酸包埋的時(shí)間為1～12分鐘。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的微囊化免疫細(xì)胞凍存方法，其特征在于，所述聚賴氨酸包埋后，還包括采用有機(jī)酸溶液液化微囊的步驟。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微囊化免疫細(xì)胞凍存方法，其特征在于，所述細(xì)胞凍存液包括二甲基亞砜、人血清和AIM-V培養(yǎng)基。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的微囊化免疫細(xì)胞凍存方法，其特征在于，所述AIM-V培養(yǎng)基中，二甲基亞砜的體積分?jǐn)?shù)為5～15％，人血清的體積分?jǐn)?shù)為5～15％。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微囊化免疫細(xì)胞凍存方法，其特征在于，所述凍存過程，還包括以下步驟：

將置于所述細(xì)胞凍存液中的微囊化免疫細(xì)胞溫度降至-60～-100℃后，置于-170～-200℃溫度下凍存。

9.一種微囊化免疫細(xì)胞凍存后的復(fù)蘇方法，其特征在于，將權(quán)利要求1～8任一項(xiàng)所述的凍存后微囊化免疫細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇的過程，包括以下步驟：

將凍存后的微囊化免疫細(xì)胞以20～40℃/min的速度升溫至-100℃，然后置于含有體積分?jǐn)?shù)為20％～40％二甲基亞砜的水溶液中迅速升溫至融化。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的微囊化免疫細(xì)胞凍存后的復(fù)蘇方法，其特征在于，微囊化免疫細(xì)胞解凍之后，于室溫下將微囊化免疫細(xì)胞放入磷酸鹽緩沖液中稀釋，逐步透出二甲基亞砜，離心棄上清，洗滌，加入無血清培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。