[發(fā)明專利]檢測(cè)嗎啡及可待因的酶聯(lián)免疫試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610180320.9
• 申請(qǐng)日: 2016-03-26
• 公開（公告）號(hào): CN107228939B
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張林田;何方洋;梁希揚(yáng);萬宇平;黃學(xué)泓;馮才偉;張冬輝;羅曉琴;楊晞;王琳琛;崔海峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京勤邦生物技術(shù)有限公司;汕頭出入境檢驗(yàn)檢驗(yàn)局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明提供了一種檢測(cè)嗎啡及可待因的酶聯(lián)免疫試劑盒，其包括包被有嗎啡偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、嗎啡單克隆抗體、酶標(biāo)記抗抗體、嗎啡標(biāo)準(zhǔn)品溶液、底物顯色液、終止液、洗滌液、復(fù)溶液。本發(fā)明還公開了一種應(yīng)用上述酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)嗎啡及可待因的方法，它包括：首先進(jìn)行樣品前處理，然后用試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，最后分析檢測(cè)結(jié)果。本發(fā)明提供的酶聯(lián)免疫試劑盒可用于檢測(cè)火鍋底料及辣椒醬中嗎啡及可待因的殘留量，其操作簡便、費(fèi)用低廉、靈敏度高、能夠現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控且適合大量樣本的篩查。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)，具體涉及一種用于檢測(cè)嗎啡及可待因的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特別適于火鍋底料及辣椒醬中嗎啡及可待因殘留量的檢測(cè)。

背景技術(shù)

罌粟殼俗稱大煙殼，為罌粟科植物罌粟割取漿汁后的干燥成熟果殼，內(nèi)含20多種生物堿，其中含量最多的生物堿分別為嗎啡、可待因、蒂巴因、罌粟堿、那可汀。罌粟殼中生物堿雖然含量較少，但如果長期食用含有這類毒品的食物，會(huì)出現(xiàn)發(fā)冷、出虛汗、乏力、面黃肌瘦、犯困等癥狀，嚴(yán)重時(shí)可能對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)造成損害，甚至出現(xiàn)內(nèi)分泌失調(diào)等癥狀。在我國，罌粟殼作為非食用物質(zhì)，是不允許在食品及調(diào)味品中添加使用的。但近年來少數(shù)食品生產(chǎn)經(jīng)營者為了招攬顧客、牟取暴利，在火鍋及其調(diào)味料中添加罌粟殼及其水浸物等違禁原料，使食物味道鮮美，嚴(yán)重危害消費(fèi)者的健康。

檢測(cè)罌粟殼中生物堿的方法主要有紫外分光光度法、熒光分光光度法、高效液相色譜法以及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等。這些方法各有特點(diǎn)，現(xiàn)以高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法為主流，這兩種方法靈敏、準(zhǔn)確，特異性強(qiáng)、分離度好，可以同時(shí)測(cè)定多種藥物，但需要昂貴的儀器、樣品的前處理復(fù)雜、繁瑣費(fèi)時(shí)、檢測(cè)的成本較高，不能現(xiàn)場(chǎng)操作，而且需專業(yè)人員操作，所以限制了其應(yīng)用。與之相比，酶聯(lián)免疫方法具有特異性好、靈敏度高、操作簡便、檢測(cè)成本低、適合于批量樣品的篩選檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，而且所需設(shè)備少，操作簡單易學(xué)，成本低廉，能夠更好地滿足我國食品企業(yè)、政府職能監(jiān)管部門等開展檢測(cè)工作。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種結(jié)構(gòu)簡單、使用方便、價(jià)格便宜、便于攜帶的用于嗎啡及可待因檢測(cè)的酶聯(lián)免疫試劑盒，并提供一種高效、準(zhǔn)確、簡便、適于大批量樣品篩選的定性、定量檢測(cè)方法。

本發(fā)明試劑盒，它包括：包被有嗎啡偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、嗎啡單克隆抗體、酶標(biāo)記抗抗體、嗎啡標(biāo)準(zhǔn)品溶液、底物顯色液、終止液、洗滌液、復(fù)溶液；所述嗎啡偶聯(lián)抗原是由嗎啡半抗原與載體蛋白偶聯(lián)得到，所述載體蛋白為鼠血清蛋白、甲狀腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血藍(lán)蛋白或纖維蛋白原；所述嗎啡半抗原是由3-氟-4-硝基苯胺與亞硝酸鈉反應(yīng)得到重氮鹽，再與嗎啡反應(yīng)得到的，其分子結(jié)構(gòu)式為：

所述嗎啡單克隆抗體是以嗎啡偶聯(lián)抗原作為免疫原制備獲得。

所述抗抗體為羊抗鼠抗抗體。

所述酶標(biāo)記抗抗體的標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶或細(xì)菌提取堿性磷酸酯酶，其中優(yōu)選辣根過氧化物酶；酶標(biāo)記的抗抗體是采用戊二醛法或過碘酸鈉法將標(biāo)記酶與抗抗體進(jìn)行偶聯(lián)得到的。

為了更方便現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控和大量樣品篩查，所述試劑盒還包括嗎啡標(biāo)準(zhǔn)品溶液、底物顯色液、終止液、洗滌液、復(fù)溶液。

所述嗎啡標(biāo)準(zhǔn)品溶液6瓶，濃度分別為0μg/L、0.3μg/L、0.9μg/L、2.7μg/L、8.1μg/L、24.3μg/L。

當(dāng)標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶時(shí)，所述底物顯色液由A液和B液組成，A液為過氧化氫或過氧化脲，B液為鄰苯二胺或四甲基聯(lián)苯胺，所述終止液為1～2mol/L的硫酸或鹽酸緩沖液；當(dāng)標(biāo)記酶為細(xì)菌提取堿性磷酸酯酶時(shí)，所述底物顯色液為對(duì)硝基磷酸鹽緩沖液，所述終止液為1～2mol/L氫氧化鈉溶液。

所述洗滌液優(yōu)選為pH為7.6，含有0.8％～1.2％吐溫-20和0.01‰～0.02‰疊氮化鈉的0.2～0.4mol/L磷酸鹽緩沖液。