[發(fā)明專(zhuān)利]一種提高PCR特異性的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610180221.0
• 申請(qǐng)日: 2016-03-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105647909B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-09-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫莉萍;鐘勇;熊云景
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廈門(mén)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/10
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/10;C08F292/00;C08F220/06;C08F220/56;C08G83/00;C08G73/00
• 代理公司: 廈門(mén)市首創(chuàng)君合專(zhuān)利事務(wù)所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭;姜謐

1.一種提高PCR特異性的方法，其特征在于：在PCR反應(yīng)體系中添加聚合物修飾的氧化石墨烯來(lái)進(jìn)行反應(yīng)，使得經(jīng)過(guò)二至三輪的PCR，產(chǎn)物仍然能保持特異性，該聚合物修飾的氧化石墨烯在PCR反應(yīng)體系中的終濃度為0.6～38.4μg/mL，上述聚合物為聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚乙二醇或聚磺基甜菜堿，其中，

當(dāng)所述聚合物為聚丙烯酸時(shí)，所述聚合物修飾的氧化石墨烯在PCR反應(yīng)體系中的終濃度為0.6～2.4μg/mL；

當(dāng)所述聚合物為聚丙烯酰胺時(shí)，所述聚合物修飾的氧化石墨烯在PCR反應(yīng)體系中的終濃度為2.4～9.6μg/mL；

當(dāng)所述聚合物為聚乙二醇時(shí)，所述聚合物修飾的氧化石墨烯在PCR反應(yīng)體系中的終濃度為4.8～19.2μg/mL；

當(dāng)所述聚合物為聚磺基甜菜堿時(shí)，所述聚合物修飾的氧化石墨烯在PCR反應(yīng)體系中的終濃度為4.8～38.4μg/mL。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述聚合物修飾的氧化石墨烯的制備方法如下：取0.8～1.2mg/mL氧化石墨烯45～55mL和0.8～1.2g丙烯酸單體混合均勻，通氮?dú)庖猿ト芤褐械臍埩舻难酰^而加入75～85mg過(guò)硫酸銨，同時(shí)加熱到68～72℃反應(yīng)2.5～3.5h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻到室溫，加入180～220mL水進(jìn)行稀釋?zhuān)?～1.3h，透析以除去未接上氧化石墨烯的聚丙烯酸，離心收集固體，真空干燥后，即得所述聚合物修飾的氧化石墨烯。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述聚合物修飾的氧化石墨烯的制備方法如下：取0.8～1.2mg/mL氧化石墨烯45～55mL和0.8～1.2g丙烯酰胺單體混合均勻，通氮?dú)庖猿ト芤褐械臍埩舻难酰^而加入75～85mg過(guò)硫酸銨，同時(shí)加熱到68～72℃反應(yīng)2.5～3.5h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻到室溫，加入180～220mL水進(jìn)行稀釋?zhuān)?～1.3h，透析以除去未接上氧化石墨烯的聚丙烯酰胺，離心收集固體，真空干燥后，即得所述聚合物修飾的氧化石墨烯。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述聚合物修飾的氧化石墨烯的制備方法如下：取10mL 3M的NaOH加入45～55mL 0.8～1.2mg/mL的氧化石墨烯中，超聲反應(yīng)2.5～3.5h，然后加入一定量的HCl中和過(guò)量的NaOH至中性，繼而過(guò)濾水洗，并重新分散到水中，加入1.8～2.2mg/mL氨基修飾的PEG超聲反應(yīng)4～5min后加入4.5～5.5mM的EDC繼續(xù)超聲25～40min，最后再加入足量EDC至20mM攪拌過(guò)夜，離心取上清即得所述聚合物修飾的氧化石墨烯，上述氨基修飾的PEG的結(jié)構(gòu)式為且分子量為4000～6000。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述聚合物修飾的氧化石墨烯的制備方法如下：取0.8～1.2mg/mL氧化石墨烯45～55mL，0.8～1.2g磺基甜菜堿單體，通氮?dú)庖猿ト芤褐械臍埩舻难酰^而加入75～85mg過(guò)硫酸鉀，同時(shí)加熱到63～67℃反應(yīng)13～17h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻到室溫，透析至除去未接上氧化石墨烯的聚磺基甜菜堿，離心取上清即得所述聚合物修飾的氧化石墨烯。