[發明專利]一種提高PCR特異性的方法

有效

• 申請號: 201610180221.0
• 申請日: 2016-03-25
• 公開（公告）號: CN105647909B
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發明（設計）人: 孫莉萍;鐘勇;熊云景
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C08F292/00;C08F220/06;C08F220/56;C08G83/00;C08G73/00
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭;姜謐

本發明公開了一種提高PCR特異性的方法，在PCR反應體系中添加聚合物修飾的氧化石墨烯來進行反應，使得經過二至三輪的PCR，產物仍然能保持特異性，該聚合物修飾的氧化石墨烯在PCR反應體系中的終濃度為0.6～38.4μg/mL，上述聚合物為聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚乙二醇或聚磺基甜菜堿。本發明的方法在PCR反應體系中添加聚合物修飾的氧化石墨烯，可以顯著增強PCR反應的特異性。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種提高PCR特異性的方法。

背景技術

PCR是一種體外選擇性擴增DNA的技術，每次擴增都以上一次擴增的產物作模板，目標產物在幾小時內增加數百萬倍。雖然PCR非常敏感，但是很多因素會影響PCR的擴增效率，如引物序列、模板DNA的GC含量、Mg²⁺濃度、退火溫度等。為了克服PCR容易產生非特異性產物的局限性，納米材料被用作添加劑來改善PCR。2005年首次發現金納米粒子能提高PCR的產量及特異性(AngewandteChemie International Edition,2005,44:5100-5103)。此后發現量子點(Biochimie,2009.91:969-973)、碳納米材料(Nanotechnology,2004,15:154-157)、聚合物納米粒子(ACS applied materials&interfaces,2015,7:13142-13153)等對PCR都有一定的改善。

發明內容

本發明的目的在于提供一種提高PCR特異性的方法。

本發明的具體技術方案如下：

一種提高PCR特異性的方法，在PCR反應體系中添加聚合物修飾的氧化石墨烯來進行反應，使得經過二至三輪的PCR，產物仍然能保持特異性，該聚合物修飾的氧化石墨烯在PCR反應體系中的終濃度為0.6～38.4μg/mL，上述聚合物為聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚乙二醇或聚磺基甜菜堿。

在本發明的一個優選實施方案中，所述聚合物為聚丙烯酸，所述聚合物修飾的氧化石墨烯在PCR反應體系中的終濃度為0.6～2.4μg/mL。

在本發明的一個優選實施方案中，所述聚合物為聚丙烯酰胺，所述聚合物修飾的氧化石墨烯在PCR反應體系中的終濃度為2.4～9.6μg/mL。

在本發明的一個優選實施方案中，所述聚合物為聚乙二醇，所述聚合物修飾的氧化石墨烯在PCR反應體系中的終濃度為4.8～19.2μg/mL。

在本發明的一個優選實施方案中，所述聚合物為聚磺基甜菜堿，所述聚合物修飾的氧化石墨烯在PCR反應體系中的終濃度為4.8～38.4μg/mL。

進一步優選的，所述聚合物修飾的氧化石墨烯的制備方法如下：取0.8～1.2mg/mL氧化石墨烯45～55mL和0.8～1.2g丙烯酸單體混合均勻，通氮氣以除去溶液中的殘留的氧，繼而加入75～85mg過硫酸銨，同時加熱到68～72℃反應2.5～3.5h,反應結束后冷卻到室溫，加入180～220mL水進行稀釋，超聲1～1.3h，透析以除去未接上氧化石墨烯的聚丙烯酸，離心收集固體，真空干燥后，即得所述聚合物修飾的氧化石墨烯。

進一步優選的，所述聚合物修飾的氧化石墨烯的制備方法如下：取0.8～1.2mg/mL氧化石墨烯45～55mL和0.8～1.2g丙烯酰胺單體混合均勻，通氮氣以除去溶液中的殘留的氧，繼而加入75～85mg過硫酸銨，同時加熱到68～72℃反應2.5～3.5h,反應結束后冷卻到室溫，加入180～220mL水進行稀釋，超聲1～1.3h，透析以除去未接上氧化石墨烯的聚丙烯酰胺，離心收集固體，真空干燥后，即得所述聚合物修飾的氧化石墨烯。