[發明專利]高危型人乳頭狀瘤病毒檢測方法及其采用的寡核苷酸序列和寡核苷酸探針

在審

• 申請號: 201610179679.4
• 申請日: 2016-03-25
• 公開（公告）號: CN105671206A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 繆婷婷;江華;王周平;虞斌;董一善
• 申請（專利權）人: 常州市婦幼保健院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 常州市江海陽光知識產權代理有限公司 32214
• 代理人: 孫曉暉

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種高危型人乳頭狀瘤病毒檢測方法及其采用的寡核苷酸序列和寡核苷酸探針。

背景技術

人乳頭狀瘤病毒（HumanPapillomaVirus，HPV）是一種嗜上皮性病毒，具有高度的特異性，屬于雙鏈閉環的小DNA病毒，包含約8000個堿基對。迄今為止，已發現的HPV有100多個型別，各型別與體內特定感染部位和病變有關，其中有40多個型別與人類生殖道疾病有關。HPV感染主要是通過性生活傳播，感染后通常沒有明顯的臨床癥狀，感染的高峰年齡在18～28歲。然而大部分婦女的HPV感染為一過性，經2～3年內一般可自行消失，大約只有10%～15%的35歲以上的婦女有持續感染的情況，HPV持續感染將有患宮頸癌的風險。

在臨床上，根據HPV亞型致病力大小或致癌危險性大小不同，將HPV分為低危型和高危型兩大類。低危型主要導致尖銳濕疣和低度宮頸上皮內瘤變CINⅠ，如HPV6、HPV11、HPV30、HPV39、HPV42、HPV43、HPV44亞型。高危型除可引起生殖器疣病外，更重要的是引起外生殖器癌、宮頸癌和CINⅡ、CINⅢ，如HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV66等。有報道稱99.8%的子宮頸癌活檢標本中可以檢測到HPV-DNA，其中，HPV16和HPV18型致病率最強，約占70%。HPV16型感染多見于宮頸鱗癌，而HPV18型感染多見于宮頸腺癌。在婦女的一生中，可反復感染HPV，也可同時感染多種不同型別的HPV。隨著年齡的增長，宮頸HPV的感染率明顯下降，這可能與機體免疫功能增強以及對病毒的限制或清除有關。

HPV檢測已成為宮頸癌的常用篩查方法，通過HPV的篩查可發現宮頸癌的早期患者，或者具有患宮頸癌的高危人群，有利于宮頸癌的早期發現和早期治療，對于宮頸癌的預防及治療，以及降低宮頸癌的發病率和死亡率具有非常重要的意義。

目前已存在的HPV檢測方法主要有細胞學檢查（主要包括薄層液基制片技術、巴氏涂片法等）、核酸雜交技術（如熒光原位雜交法、斑點雜交法、southen雜交法等）、PCR技術（如實時熒光定量PCR等）、HPV-DNA分型檢測、雜交捕獲二代、基因芯片技術和SP法。而目前臨床上常用的檢測方法主要是HPV分型檢測、雜交捕獲二代（HCⅡ）以及實時熒光定量PCR。然而這些方法都存在一定的不足，比如，HPV分型檢測操作較為繁瑣；而HCⅡ雖然特異性和靈敏性均較好，也已廣泛認可，但是試劑較昂貴，成本較高，而且發光信號不穩定；而PCR技術也存在標本易污染、假陽性率高等問題。因此，探索一種操作簡便、特異性強、靈敏度高、成本低并且適合臨床大規模篩查的新方法就顯得很有意義。

隨著生命科學的不斷發展，近年來的研究也越來越關注納米技術在生物技術方面的應用，目前納米生物技術已成為國際生物領域最前沿的研究熱點。雖然我國在這方面已取得了一些成果，但由于研究時間較短，今后還要在納米醫用材料、納米農藥、納米生物傳感器等方面進行深入研究，這些納米技術主要應用的就是納米粒子。近年來，四種類型的納米粒子已經得到了廣泛的研究和應用：（1）納米金顆粒；（2）量子點；（3）核殼型熒光納米顆粒；（4）高分子納米微球。其中以金納米顆粒、量子點、核殼型熒光納米顆粒為代表的納米粒子在生物芯片、免疫檢測分析、基因突變檢測、遺傳病和腫瘤診斷、藥物研究、食品及環境中的檢測等領域發揮著重要作用，這方面的研究進展和研究成果引人注目，尤其是新型發光納米材料——量子點。