[發明專利]高危型人乳頭狀瘤病毒檢測方法及其采用的寡核苷酸序列和寡核苷酸探針

在審

• 申請號: 201610179679.4
• 申請日: 2016-03-25
• 公開（公告）號: CN105671206A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 繆婷婷;江華;王周平;虞斌;董一善
• 申請（專利權）人: 常州市婦幼保健院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 常州市江海陽光知識產權代理有限公司 32214
• 代理人: 孫曉暉

1.一種高危型人乳頭狀瘤病毒檢測方法，其特征在于具有以下步驟：

S1：設計并合成特異性寡核苷酸序列；所述特異性寡核苷酸序列為下述Seq1和Seq3、或者為下述Seq2和Seq4；

Seq1：5'-CATCTGCAAAAAAATA-Biotin-3'；

Seq2：5'-TCAACATCCCAAAA-Biotin-3'；

Seq3：5'-NH₂-GTCACTAGGCCGCCA-Biotin-3'；

Seq4：5'-NH₂-AAAACTTTTCCTTTA-Biotin-3'；

上述Seq1和Seq2為捕獲DNA序列；上述Seq3和Seq4為顯示DNA序列；

S2：分別制備CdTe量子點、硅納米粒子以及磁性納米粒子；

S3：將步驟S1中的顯示DNA序列分別與CdTe量子點和硅納米粒子結合得到顯示探針；將步驟S1中的捕獲DNA序列與磁性納米粒子結合得到捕獲探針；將待測樣品先后與捕獲探針以及顯示探針混合，根據混合液的熒光強度判斷待測樣品中是否含有高危型人乳頭狀瘤病毒。

2.根據權利要求1所述的高危型人乳頭狀瘤病毒檢測方法，其特征在于：上述步驟S2中所述的CdTe量子點為親和素化的CdTe量子點；上述步驟S2中所述的CdTe量子點的平均粒徑為3～5nm；上述步驟S2中所述的硅納米粒子為戊二醛交聯的氨基化硅納米粒子；上述步驟S3中所述的硅納米粒子的平均粒徑為90～110nm；上述步驟S2中所述的磁性納米粒子為親和素化的氨基化Fe₃O₄磁性納米粒子；上述步驟S2中所述的磁性納米粒子的平均粒徑為45～50nm。

3.根據權利要求1或2所述的高危型人乳頭狀瘤病毒檢測方法，其特征在于：上述步驟S3中顯示DNA序列的生物素化端與CdTe量子點結合，氨基化端通過戊二醛交聯劑與硅納米粒子結合。

4.根據權利要求1所述的高危型人乳頭狀瘤病毒檢測方法，其特征在于：上述步驟S3中硅納米粒子的濃度為1mg/mL～10mg/mL。

5.根據權利要求1所述的高危型人乳頭狀瘤病毒檢測方法，其特征在于：上述步驟S3中捕獲探針的濃度為0.1mg/mL～1mg/mL。

6.一種高危型人乳頭狀瘤病毒檢測方法采用的寡核苷酸序列，其特征在于：為下述Seq1和Seq3、或者為下述Seq2和Seq4；

Seq1：5'-CATCTGCAAAAAAATA-Biotin-3'；

Seq2：5'-TCAACATCCCAAAA-Biotin-3'；

Seq3：5'-NH₂-GTCACTAGGCCGCCA-Biotin-3'；

Seq4：5'-NH₂-AAAACTTTTCCTTTA-Biotin-3'；

上述Seq1和Seq2為捕獲DNA序列；上述Seq3和Seq4為顯示DNA序列。

7.一種高危型人乳頭狀瘤病毒檢測方法采用的寡核苷酸探針，其特征在于：包括捕獲探針和顯示探針；所述捕獲探針由捕獲DNA序列與磁性納米粒子結合得到；所述顯示探針由顯示DNA序列分別與CdTe量子點和硅納米粒子結合得到；

所述捕獲DNA序列為下述Seq1或者Seq2；所述顯示DNA序列為下述Seq3或者Seq4；

Seq1：5'-CATCTGCAAAAAAATA-Biotin-3'；

Seq2：5'-TCAACATCCCAAAA-Biotin-3'；

Seq3：5'-NH₂-GTCACTAGGCCGCCA-Biotin-3'；

Seq4：5'-NH₂-AAAACTTTTCCTTTA-Biotin-3'。