[發明專利]測量液體樣品中細菌含量的方法

在審

• 申請號: 201610178405.3
• 申請日: 2016-03-25
• 公開（公告）號: CN107228943A
• 公開（公告）日: 2017-10-03
• 發明（設計）人: 孫冰;王林;石寧;趙磊
• 申請（專利權）人: 中國石油化工股份有限公司;中國石油化工股份有限公司青島安全工程研究院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所(普通合伙)31251
• 代理人: 王法男

本發明涉及一種測量液體樣品中細菌含量的方法，主要解決現有技術中測量速度較慢、不便捷、結果不準確的問題。本發明通過采用一種測量液體樣品中細菌含量的方法，在液體樣品中細菌含量測量裝置上，進行液體樣品中細菌含量的測量；所述裝置包括箱體、試劑管放置位置、試劑管、觀察孔以及細菌富集和蛋白質分子捕捉設備的技術方案較好地解決了上述問題，可用于測量液體樣品中細菌含量中。

技術領域

本發明涉及一種測量液體樣品中細菌含量的方法。

背景技術

由細菌等微生物的生命活動引起的材料的腐蝕破壞被稱為微生物腐蝕(MIC)。MIC是一種普遍存在的現象。油氣田、油罐、加油站、油路甚至汽車油箱中都存在著大量的細菌。每年因腐蝕而造成的經濟損失在一百億美元以上。其中最主要的腐蝕微生物為硫酸鹽還原菌(SRB)，造成了美國生產油井77％以上的腐蝕損失。SRB能夠在無氧環境下，以環境中的有機物為碳源，利用細菌生物膜內產生的氫，將硫酸鹽還原為硫化氫，從氧化還原反應中獲得能量，而金屬也在此過程中被氧化腐蝕。目前SRB的檢測方法主要有三種，分別為：培養檢測技術、顯微鏡檢測技術和生化直接檢測技術。培養檢測技術是目前應用較為廣泛的一種方法，其原理是將樣品做梯度稀釋，在適當的培養基上進行培養，最終根據稀釋倍數和細菌的陽性反應進行定量。該法的主要依據是美國石油協會API推薦的絕跡稀釋法，我國石油行業標準SY/T 0532-2012《油田注入水細菌分析方法絕跡稀釋法》中也有詳細規定。相關專利已有報道(如CN102329851A、CN103983636A、CN1769472A、CN200510010459等)，目前市場上也存在SRB專用測試瓶可供購買。培養檢測技術的優點在于操作簡單、成本低廉，結果準確性較高。其主要缺點在于耗時長(2-14天)，培養菌種不完全導致定量結果偏低。一旦陰性對照組出現菌類生長，需要重做實驗，很難保證重新采樣結果與原樣本一致。

顯微鏡檢測技術結合了特異性染色方法與熒光計數方法，將熒光基團選擇性地標記到SRB的表面，然后在熒光顯微鏡下計數以定量。但此種方法仍然需要短期培養以提高菌類濃度，培養周期在兩天左右。雖然其操作相對簡單、定量成本低，但需要染料分子的高特異性，且不能提供細菌活性的相關信息。

生化直接檢測技術包含了多種具體方式【關淑霞葉海春范瑩瑩油田污水中硫酸鹽還原菌檢測技術的研究進展 化學與生物工程 2012 29 17】，可以檢測SRB內部或表面的某種蛋白(如用酶聯免疫吸附劑測定ELISA方法測定腺苷-5’-磷酸硫酸鹽還原酶APS【如GB2354072B、CN103983636A、EP272916A1】)，可以檢測SRB特異性的核酸分子序列(如聚合酶鏈式反應PCR方法【CN105112543A、CN1769472A、CN200510010459】、熒光原位雜交FISH方法【王明義 梁小兵 鄭婭萍 趙由之 魏中青 硫酸鹽還原菌鑒定和檢測方法的研究進展 微生物學雜志 2005 25 81】)，也可以檢測SRB的代謝產物(如電位法或指示劑法測定H₂S)【李婉義趙自光硫酸鹽還原菌菌量檢測方法的研究—硫離子選擇電極法化學傳感器1991 1164】。這些檢測方法準確性高、特異性高、檢測周期短(幾小時左右)，但操作復雜，一般只能在專門的生化實驗室內由受過訓練的專業人員進行實驗。市場上雖然已經出現了利用ELISA方法快速測量細菌濃度的試劑盒，但該方法仍需要高速離心等操作，不適用于現場檢測。

綜上所述，目前缺乏一種快速、便捷、準確的SRB的現場測定方法和裝備。本專利描述的是一種基于ELISA方法的樣品中細菌的特異性、簡單化、可攜帶式定量檢測裝置和方法，無需外接電源。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是現有技術中測量速度較慢、不便捷、結果不準確的問題，提供一種新的測量液體樣品中細菌含量的方法。該方法具有快速、便捷、準確的優點。