[發(fā)明專利]一種非致病性尖孢鐮刀菌植物疫苗制劑的生產(chǎn)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610177771.7
• 申請(qǐng)日: 2016-03-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105767009A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉波;肖榮鳳;朱育菁;陳燕萍;史懷;葛慈斌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物資源研究所
• 主分類號(hào): A01N63/02
• 分類號(hào): A01N63/02;A01P1/00
• 代理公司: 福州市鼓樓區(qū)京華專利事務(wù)所(普通合伙) 35212
• 代理人: 林云嬌

1.一種非致病性尖孢鐮刀菌植物疫苗制劑的生產(chǎn)方法，其特征在于： 所述方法步驟如下：

步驟(1)生產(chǎn)用液體菌種的制備：以非致病性尖孢鐮刀菌FJAT-9290 (Fusariumoxysporum)為菌種，以馬鈴薯葡萄糖瓊脂PDA培養(yǎng)基和查氏酵 母培養(yǎng)液為液體菌種用培養(yǎng)基，制備生產(chǎn)用液體菌種；

步驟(2)非致病性尖孢鐮刀菌植物疫苗制劑的制備：以豬糞廢棄物為 主要成份制備植物疫苗生產(chǎn)的固體培養(yǎng)基物，與麩皮、麥粒混合后，分裝于 聚丙烯塑料袋中，滅菌后，接種步驟(1)所制備的液體菌種，28-30℃恒溫 培養(yǎng)發(fā)酵18-20天，制備植物疫苗固體發(fā)酵產(chǎn)物，發(fā)酵結(jié)束后將其拌勻， 即得非致病性尖孢鐮刀菌植物疫苗；

所述尖孢鐮刀菌FJAT-9290(Fusariumoxysporum)，于2012年3月 29日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址為北京 市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)為CGMCCNo.5910。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種非致病性尖孢鐮刀菌植物疫苗制劑的生 產(chǎn)方法，其特征在于：所述步驟(1)中生產(chǎn)用液體菌種制作步驟具體為：

步驟A.菌種的活化：配置PDA培養(yǎng)基，121℃滅菌20min，冷卻至45 ℃倒于滅菌平板中，備用；取-70℃保存的非致病性尖孢鐮刀菌FJAT-9290 (Fusariumoxysporum)菌株于PDA培養(yǎng)基平板上劃線培養(yǎng)，28～30℃恒溫 培養(yǎng)5～7天；

步驟B.配置查氏酵母培養(yǎng)液，挑取步驟A中菌絲接種于查氏酵母培養(yǎng) 液中，28～30℃，170～200rpm搖床培養(yǎng)5～7天，即為生產(chǎn)用液體菌種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種非致病性尖孢鐮刀菌植物疫苗制劑的生 產(chǎn)方法，其特征在于：所述步驟(2)中非致病性尖孢鐮刀菌植物疫苗制劑 的制備步驟具體為：

步驟C.以豬糞廢棄物為主要成份的固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制：豬糞廢棄物 與麩皮按質(zhì)量比為100:3～20:3配制形成固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基；

步驟D.基礎(chǔ)培養(yǎng)基中麥粒、無(wú)機(jī)碳源和無(wú)機(jī)氮源的添加：在基礎(chǔ)培養(yǎng) 基中添加麥粒作為固體培養(yǎng)基的疏松物質(zhì)，再添加蔗糖和硝酸鈉，攪拌均勻 后加水，調(diào)整含水體積比為30％～50％，轉(zhuǎn)入聚丙烯塑料袋中，滅菌；

步驟F.非致病性尖孢鐮刀菌植物疫苗制劑的培養(yǎng)與制備：往步驟D的 培養(yǎng)基中接種步驟(1)中制備的液體菌種質(zhì)量比為1-10％，28～30℃恒溫下 發(fā)酵18-20天，即植物疫苗固體發(fā)酵產(chǎn)物，發(fā)酵結(jié)束后將其通風(fēng)干燥后拌 勻，即得非致病性尖孢鐮刀菌植物疫苗制劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種非致病性尖孢鐮刀菌植物疫苗制劑的生 產(chǎn)方法，其特征在于：步驟C中豬糞廢棄物與麩皮按質(zhì)量比為19:1～3:1。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用非致病性尖孢鐮刀菌植物疫苗制劑的方 法，其特征在于：步驟D中的麥粒需浸泡處理，浸泡時(shí)間12-24h，使麥粒 充分吸水膨脹。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種非致病性尖孢鐮刀菌植物疫苗制劑的生 產(chǎn)方法，其特征在于：每1000g基礎(chǔ)培養(yǎng)基所需的麥粒為300～500g、蔗糖 為20～40g、硝酸鈉為1～3g。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種非致病性尖孢鐮刀菌植物疫苗制劑的生 產(chǎn)方法，其特征在于：每1000g基礎(chǔ)培養(yǎng)基所需的麥粒為400g、蔗糖為30g、 硝酸鈉為2g。