[發(fā)明專利]一種酶法制備谷胱甘肽的工藝方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201610175631.6
• 申請日: 2016-03-26
• 公開（公告）號: CN105779534A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發(fā)明（設計）人: 吳鋒;許劉華;劉曉慶;周江;華俊國
• 申請（專利權）人: 江蘇誠信藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種酶法制備谷胱甘肽的工藝方法，其特征在于包括以下步驟：

1）向反應釜中加入L-谷氨酸鈉（L-Glu.Na)，L-半胱氨酸(L-Cys)，甘氨酸(Gly)，三磷酸 腺苷二鈉（ATP.Na2），六水氯化鎂（MgCl2.6H2O），六偏磷酸鈉[(NaPO3)6]，二硫蘇糖醇 （DTT）和純化水攪拌溶解；

2）采用抽真空氮氣置換的方法置換反應體系中的空氣，置換完畢氮氣保護整個反應體 系；

在25-45℃、氮氣保護下，用堿性溶液調節(jié)pH值至6.0-8.0；

3）加入反應液1%-3%的谷胱甘肽酶液，氮氣保護下、25-45℃攪拌反應2-4h，反應過程中 用堿性溶液控制反應體系pH值在6.0-8.0；

4）反應完畢，放料，料液離心除去不溶物，收集濾液；

5）將得到的濾液通過超濾機進行超濾，收集超濾透析液；

6）將超濾透析液調酸后上DA201-C型大孔吸附樹脂柱；該大孔樹脂柱的徑高比為0.05- 0.2，上樣pH值為2.0-3.5；

7）用1-3bv的純化水沖洗大孔樹脂柱；

8）用50%-95%的乙醇洗脫解吸附大孔樹脂柱，收集茚三酮顯色部分洗脫液；

9）將收集的洗脫液30-50℃減壓濃縮，真空度≤-0.09MPa，濃縮至GSH含量為15%-30%；

10）往濃縮液中加入0.5-1.5倍量的有機溶劑，氮氣保護下、0-25℃（優(yōu)選10-15℃）攪拌 析晶10-24h（優(yōu)選18-20h）；

11）析晶完畢，放料離心，乙醇洗滌，30-50℃減壓至真空度≤-0.09MPa，干燥6-8h，得谷 胱甘肽粗品。

2.根據(jù)權利要求1所述的酶法制備谷胱甘肽的工藝方法，其特征在于：所述步驟1）中L- Glu.Na的投料量為9-16g/L，L-Cys的投料量為6-11g/L，Gly的投料量為4-8g/L，ATP.Na2 的投料量為0.6-1.2g/L，MgCl2.6H2O投料量為14-24g/L，(NaPO3)6投料量為21-40g/L， DTT投料量為0.1-1.5g/L。

3.根據(jù)權利要求1所述的酶法制備谷胱甘肽的工藝方法，其特征在于：上述步驟中的堿 性溶液為氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鉀、碳酸鉀、碳酸氫鉀、氨水中的一種。

4.根據(jù)權利要求1所述的酶法制備谷胱甘肽的工藝方法，其特征在于：所述步驟11）中 的有機溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇或丙酮中的一種。

5.根據(jù)權利要求1所述的酶法制備谷胱甘肽的工藝方法，其特征在于：所述置換反應體 系中的空氣的次數(shù)為三次。