[發明專利]水蜜桃果實ICE1基因、其克隆方法及應用

在審

• 申請號: 201610175621.2
• 申請日: 2016-03-26
• 公開（公告）號: CN105695481A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 萬嗣寶;朱月瑩
• 申請（專利權）人: 上海大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/415;C12N15/10;C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 上海上大專利事務所(普通合伙) 31205
• 代理人: 顧勇華

1.一種水蜜桃果實ICE1基因，其特征在于該基因為SEQIDNO.1所示的堿基序列。

2.一種根據權利要求1所述的水蜜桃果實ICE1基因的編碼蛋白，其特征在于該編碼蛋 白為SEQIDNO.2所示的氨基酸序列。

3.一種載體，其特征在于該載體含有根據權利要求1所述的水蜜桃果實ICE1基因。

4.一種重組質粒，其特征在于該質粒含有根據權利要求3所述的載體。

5.一種根據權利要求1所述的水蜜桃果實ICE1基因的克隆方法，其特征在于該方法的 具體步驟為：

a.以蘋果ICE1，即ABS50251為探針，在NCBI中對桃基因組數據庫進行BLAST搜索，檢索 出一條具有完整開放閱讀框的核甘酸序列XM_007209914，即為預測的桃ICE1基因序列；

b.提取水蜜桃果實總RNA，然后反轉錄獲取cDNA第一鏈;根據預測的桃ICE1序列XM_ 007209914設計擴增ICE1基因的上游引物S1和下游引物S2；再以所述反轉錄獲得的cDNA為 模板，進行聚合酶鏈式PCR反應，即得到水蜜桃果實ICE1基因；

所述的上游引物S1為：5’-TGGGCTCTCTGTCTACCT-3’；

所述的下游引物S2：5’-ACGACTCCCGTCTTTGGT-3’。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述的PCR反應的反應體系為：2×高保真 PCRMix15μL，模板1μL，上下游引物各1μL，加ddH₂O至30μL；所述的PCR反應的反應條件為： 94℃預變性4min；94℃變性30s，47℃退火30s，68℃延伸3min，35個循環；68℃再延伸10min。

7.一種根據權利要求1所述的水蜜桃果實ICE1基因在農桿菌介導的花序浸染法轉化擬 南芥中的應用。