[發(fā)明專(zhuān)利]水蜜桃果實(shí)ICE1基因、其克隆方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610175621.2
• 申請(qǐng)日: 2016-03-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105695481A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 萬(wàn)嗣寶;朱月瑩
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/29
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/29;C07K14/415;C12N15/10;C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 上海上大專(zhuān)利事務(wù)所(普通合伙) 31205
• 代理人: 顧勇華

1.一種水蜜桃果實(shí)ICE1基因，其特征在于該基因?yàn)镾EQIDNO.1所示的堿基序列。

2.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的水蜜桃果實(shí)ICE1基因的編碼蛋白，其特征在于該編碼蛋 白為SEQIDNO.2所示的氨基酸序列。

3.一種載體，其特征在于該載體含有根據(jù)權(quán)利要求1所述的水蜜桃果實(shí)ICE1基因。

4.一種重組質(zhì)粒，其特征在于該質(zhì)粒含有根據(jù)權(quán)利要求3所述的載體。

5.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的水蜜桃果實(shí)ICE1基因的克隆方法，其特征在于該方法的 具體步驟為：

a.以蘋(píng)果ICE1，即ABS50251為探針，在NCBI中對(duì)桃基因組數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST搜索，檢索 出一條具有完整開(kāi)放閱讀框的核甘酸序列XM_007209914，即為預(yù)測(cè)的桃ICE1基因序列；

b.提取水蜜桃果實(shí)總RNA，然后反轉(zhuǎn)錄獲取cDNA第一鏈;根據(jù)預(yù)測(cè)的桃ICE1序列XM_ 007209914設(shè)計(jì)擴(kuò)增ICE1基因的上游引物S1和下游引物S2；再以所述反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA為 模板，進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)絇CR反應(yīng)，即得到水蜜桃果實(shí)ICE1基因；

所述的上游引物S1為：5’-TGGGCTCTCTGTCTACCT-3’；

所述的下游引物S2：5’-ACGACTCCCGTCTTTGGT-3’。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述的PCR反應(yīng)的反應(yīng)體系為：2×高保真 PCRMix15μL，模板1μL，上下游引物各1μL，加ddH₂O至30μL；所述的PCR反應(yīng)的反應(yīng)條件為： 94℃預(yù)變性4min；94℃變性30s，47℃退火30s，68℃延伸3min，35個(gè)循環(huán)；68℃再延伸10min。

7.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的水蜜桃果實(shí)ICE1基因在農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花序浸染法轉(zhuǎn)化擬 南芥中的應(yīng)用。