[發明專利]一種包含喜樹堿的層層自組裝納米靶向載體的制備方法

有效

• 申請號: 201610175550.6
• 申請日: 2016-03-26
• 公開（公告）號: CN105748441B
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發明（設計）人: 賀金梅;顏廷勝;程鳳;劉長瑜
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K31/4745;A61K47/36;A61K47/02;A61P35/00
• 代理公司: 哈爾濱龍科專利代理有限公司 23206
• 代理人: 高媛

1.一種包含喜樹堿的層層自組裝納米靶向載體的制備方法，其特征在于所述方法步驟如下：

a、還原敏感性殼聚糖衍生物制備：（1）以ε-己內酯為單體，苯甲醇為引發劑，加入Sn（Oct）₂，控制ε-己內酯、苯甲醇以及Sn（Oct）₂的質量比為50：5～10：0.5～1，在N₂環境中80～120℃條件下不斷攪拌，持續反應12～48 h，獲得PCL-OH；（2）將0.8～1.6 g PCL-OH 加入到10 mL 二氯甲烷溶液中，另將0.8～1.6 g 對硝基苯基氯甲酸酯溶于10 mL 二氯甲烷，將兩溶液混合，室溫下反應12～48小時生成PCL-NPC；（3）將0.5～1 g胱氨和1～4 mL三乙胺溶于20 mL甲醇中，10～30 min之后，將10 mL Boc₂O甲醇溶液緩慢滴加到上述溶液中，N₂環境室溫條件下反應6～12小時生成Cys-Boc-Mono；（4）將0.4～0.8 g PCL-NPC、0.2～0.4 g Cys-Boc-Mono和0.4～0.8 mL三乙胺溶于二氯甲烷中，N₂環境室溫條件下反應12～48小時生成PCL-Cys-Boc-Mono，去保護后生成PCL-Cys-NH₂；（5）將0.4～0.8 g PCL-Cys-NH₂和0.4～0.8g 殼聚糖分散到30～50 ml 四氫呋喃中，N₂環境室溫條件下反應12～24小時后加入0.1～0.5甘草次酸、0.1～0.5 g EDC·HCl 和0.1～0.5 g NHS，N₂環境室溫條件下，繼續反應12～24小時，反應結束后，用乙醇清洗數遍，離心獲得還原環境敏感的PCL-SS-殼聚糖-甘草次酸聚合物；

b、載喜樹堿磷酸鈣納米顆粒制備：（1）取10 mg 喜樹堿和20～40 mg的氯化鈣溶于1 mL蒸餾水中混合均勻；（2）取80～120 mg的磷酸氫二鈉溶于1 mL蒸餾水中混合均勻；（3）取環己烷、己醇、Trion-X100于燒杯中充分攪拌，其體積比為3：1～3：3～5；（4）分別取10 mL（3）中的混合液放入小燒杯中標記為A和B，在A中加入80～120 μL上述氯化鈣和喜樹堿混合液，在B中加入80～120 μL上述磷酸氫二鈉溶液；將B溶液緩慢滴加到A中，反應2～4 h，加入10～20 mL乙醇破乳，用蒸餾水清洗；

c、組裝一層樣品制備：取0.1 g PCL-SS-殼聚糖-甘草次酸聚合物溶于10～20 mL 醋酸緩沖液，不斷攪拌，滴加1～2 mL 載喜樹堿磷酸鈣納米顆粒分散液，持續攪拌20～40 min，用醋酸緩沖液洗滌，離心獲得組裝一層樣品；

d、組裝兩層樣品制備：取2 g ι-卡拉膠加入到含有10～20 mL 醋酸溶液的三口瓶中，在60～80℃下攪拌至ι-卡拉膠完全溶解；不斷攪拌，滴加1～2 mL組裝一層樣品分散液，持續攪拌20～40 min，用醋酸緩沖液洗滌，離心獲得組裝兩層樣品；

e、利用c或d方法交替組裝殼聚糖衍生物與ι-卡拉膠，得到多層納米靶向載體。

2.根據權利要求1所述的包含喜樹堿的層層自組裝納米靶向載體的制備方法，其特征在于所述步驟a中，10 mL Boc₂O醇溶液中含有0.4～0.8 g Boc₂O。

3.根據權利要求1所述的包含喜樹堿的層層自組裝納米靶向載體的制備方法，其特征在于所述步驟c中，載喜樹堿磷酸鈣納米顆粒分散液的濃度為0.1 g/mL。

4.根據權利要求1所述的包含喜樹堿的層層自組裝納米靶向載體的制備方法，其特征在于所述步驟c中，醋酸緩沖液的濃度為0.2%v/v，pH為6.0。

5.根據權利要求1所述的包含喜樹堿的層層自組裝納米靶向載體的制備方法，其特征在于所述步驟d中，醋酸溶液的濃度為0.5～3%v/v。

6.根據權利要求1所述的包含喜樹堿的層層自組裝納米靶向載體的制備方法，其特征在于所述步驟d中，組裝一層樣品分散液的濃度為0.1 g/mL。