[發明專利]去甲萬古霉素衍生物及其制備純化方法

無效

• 申請號: 201610172063.4
• 申請日: 2016-03-24
• 公開（公告）號: CN105585617A
• 公開（公告）日: 2016-05-18
• 發明（設計）人: 洪斌;江志波;王麗非;雷璇;陳明華;江冰婭;武臨專;張雪霞;鄭智慧;胡辛欣;游雪甫;司書毅
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫藥生物技術研究所
• 主分類號: C07K9/00
• 分類號: C07K9/00;C07K1/18;A61K38/14;A61P31/04
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 唐寧

技術領域

本發明屬于藥物化學領域，具體而言，本發明涉及去甲萬古霉素衍生物及其制備 純化方法。

背景技術

去甲萬古霉素是一類糖肽類抗生素，在中國已經商業化應用近四十年，臨床主要 應用于治療心內膜炎、骨髓炎等嚴重感染性疾病。去甲萬古霉素主要對革蘭氏陽性菌有效， 特別是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、耐甲氧西林表皮葡萄球菌和耐青霉素的腸桿菌、肺炎 鏈球菌以及梭狀芽孢桿菌。去甲萬古霉素的產生菌為1959年李群等從貴州土壤中分離出的 放線菌萬-23號，后來命名為東方擬無枝酸菌(Amycolatopsisorientalis)。去甲萬古霉素 有著與另一個糖肽類化合物萬古霉素(VCM)基本類似的化學結構和生物活性，它們均由一 個三環組成的七肽母體和一個由葡萄糖-氨基糖組成的雙糖取代基，不同之處在于去甲萬 古霉素的N-末端較萬古霉素缺少一個N-甲基(圖1)。文獻中組成七肽的氨基酸分別以AA-1 到AA-7表示，五個芳香環從A-E依次編號，另外，三個大環的編號以芳香環編號組成A-B，C- O-D和D-O-E，為了方便化合物結構解析，本申請將沿用文獻的編號方法。

早期，萬古霉素初始使用階段，臨床使用過程中發現其引起多種負反應，如腎毒性 和耳毒性等，可能的原因是其純度低，雜質含量高的原因。隨后，人們使用高效液相色譜 (HPLC)，毛細管電泳(CE)以及液相質譜-質譜連用技術(LC-MS/MS)對萬古霉素有關物質進 行過系統深入的研究，從中發現了八個雜質分別是去氯萬古霉素A和B，去雙氯萬古霉素，萬 古霉素過程降解產物CDP-I_M和CDP-I_m，去雙糖萬古霉素，去氨基糖萬古霉素和去甲萬古霉 素。進一步藥理活性實驗研究發現，含有CDP-I_M和CDP-I_m的萬古霉素藥品能引起臨床治療失 敗，而三個去氯萬古霉素類似物的抗菌活性比萬古霉素降低了2至10倍，去氨基糖的萬古霉 素的體內抗菌活性也大大降低，MIC約為萬古霉素的五倍。因此，《歐洲藥典》和《美國藥典》 將去氨基-，去雙糖基-，和去甲基萬古霉素定義為萬古霉素原料三個主要雜質，并且規定其 單雜不得超過4％，總雜不得超過7％。

相比而言，去甲萬古霉素由于其雜質成分不明確，因此，中國藥典規定以峰面積積 分計算，總雜不得超過12％，單雜少于4％。因此，需要更為有效的純化及鑒定去甲萬古霉素 的方法，同時，為了明確去甲萬古霉素原料藥中有關物質成分結構，還可以對去甲萬古霉素 原料藥進行更為系統的化學成分研究，發掘其新結構的結構類似物。

發明內容

本發明從去甲萬古霉素原料藥中分離得到三個糖肽類化合物，借助于1D，2DNMR 和HRESIMS等方法確定三個化合物結構，均為去甲萬古霉素類似物，包括一個C-O-D開環和 兩個去糖基衍生物。

本發明首先涉及一種去甲萬古霉素及其衍生物的HPLC制備分離方法，所述方法 為：

(1)流動相：甲醇：0.05～0.2％甲酸水溶液，

(2)梯度洗脫步驟：30～50min內甲醇從10％逐漸上升至70％，

(3)將去甲萬古霉素原料藥水溶液過色譜柱，流速為1.0～5.0ml/min，檢測波長 280nm，所述的去甲萬古霉素原料藥優選為去甲萬古霉素鹽酸鹽原料藥，

(4)收集主峰產物即得去甲萬古霉素純品，收集次峰產物即得去甲萬古霉素衍生 物。

所述方法中，色譜柱優選為C18色譜柱或苯基柱。

本發明還涉及由所述方法分離獲得的去甲萬古霉素衍生物，所述的去甲萬古霉素 衍生物為：化合物1(結構如下式1所示)、化合物2或3(結構如下式2、3所示)，

R＝β-D-glucosyl，式2；

R＝H，式3

本發明還涉及所述化合物1-3在制備藥物中的應用，所述藥物為抗革蘭氏陽性菌 的藥物，所述的革蘭氏陽性菌優選為：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、耐甲氧西林表皮葡萄球 菌、耐青霉素的腸桿菌、肺炎鏈球菌以及梭狀芽孢桿菌。

附圖說明

圖1化合物1-3，去甲萬古霉素和萬古霉素的結構，化合物1的HMBC相關用虛線彎箭 頭表示。

圖2去甲萬古霉素原料藥的HPLC色譜分析圖。