[發明專利]以子葉節為外植體建立葫蘆高效再生體系的方法

在審

• 申請號: 201610168309.0
• 申請日: 2016-03-23
• 公開（公告）號: CN105766640A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 張曼;羊杏平;徐錦華;胡雪丹;劉廣;姚協豐;李蘋芳;任潤生
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231
• 代理人: 翁斌

1.一種以子葉節為外植體建立葫蘆高效再生體系的方法，其特征在于：包 括以下步驟：

(1)挑取成熟飽滿的種子，去殼得籽粒，將籽粒做消毒處理，再轉接到無 激素的MS基礎培養基上黑暗環境下恒溫培養至種子萌發，獲得無菌苗；

(2)取無菌苗，切去胚芽和下胚軸，分開子葉，每半片子葉橫切，獲得子 葉節外植體；

(3)將子葉節外植體接種于不定芽誘導培養基MS1中培養，期間定期更 換培養基，獲得不定芽簇；

(4)將不定芽簇從外植體上剝離，轉接至繼代培養基MS2中，繼續培養， 期間定期更換培養基，待不定芽長到3-4cm高時，分開不定芽簇，獲得單個不 定芽苗；

(5)將單個不定芽苗轉接至生根培養基MS3中，培養至生根；

(6)將生根的再生植株進行煉苗處理；

(7)煉苗完成后，取出再生苗，洗去根部培養基，移栽于育苗基質中，放 于溫室培養。

2.根據權利要求1所述的以子葉節為外植體建立葫蘆高效再生體系的方法， 其特征在于：步驟(1)中對籽粒消毒處理的方法為，先用體積含量為70％的 無水乙醇對籽粒表面消毒35-45S，用無菌水沖洗2-3次，再用質量濃度為10％ 的NaClO消毒8-12min，再用無菌水沖洗2-3次，最后置于無菌濾紙上控干水分。

3.根據權利要求1所述的以子葉節為外植體建立葫蘆高效再生體系的方法， 其特征在于：步驟(2)中選取萌發3d的無菌苗。

4.根據權利要求1所述的以子葉節為外植體建立葫蘆高效再生體系的方法， 其特征在于：步驟(3)中不定芽誘導培養基MS1包括：MS培養基、3.0mg·L^-1 的6-BA、0.01mg·L^-1的2,4-D、0.3mg·L^-1的AgNO₃、30g·L^-1的蔗糖和8g·L^-1的瓊脂，不定芽誘導培養基MS1的pH為5.6-6.0。

5.根據權利要求4所述的以子葉節為外植體建立葫蘆高效再生體系的方法， 其特征在于：步驟(3)中子葉節外植體在不定芽誘導培養基MS1中培養時間 為3-4周，培養條件為：培養溫度為25℃、16h光照與8h黑暗交替處理、3000Lux 光照，并每10d更換一次培養基。

6.根據權利要求1所述的以子葉節為外植體建立葫蘆高效再生體系的方法， 其特征在于：步驟(4)中培養時間為2-3周，更換培養基的頻率為每10d更換 一次培養基。

7.根據權利要求6所述的以子葉節為外植體建立葫蘆高效再生體系的方法， 其特征在于：步驟(4)中繼代培養基MS2包括：MS培養基、3.0mg·L^-1的6-BA、 0.01mg·L^-1的2,4-D、0.3mg·L^-1的AgNO₃、30g·L^-1的蔗糖和8g·L^-1的瓊脂， 繼代培養基MS2的pH為5.6-6.0。

8.根據權利要求1所述的以子葉節為外植體建立葫蘆高效再生體系的方法， 其特征在于：步驟(5)中生根培養基MS3包括：MS培養基、0.05mg·L^-1的 NAA、30g·L^-1的蔗糖和8g·L-1瓊脂，生根培養基MS3的pH為5.6-6.0， 培養至生根的時間為2周。

9.根據權利要求1所述的以子葉節為外植體建立葫蘆高效再生體系的方法， 其特征在于：步驟(6)中待再生植株根長到2cm長、再生苗長到5-6cm高時， 打開組培瓶蓋，進行練苗處理。