[發(fā)明專利]一種能夠及時觀察小麥黑胚病癥狀的接種鑒定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610167059.9
• 申請日: 2016-03-23
• 公開（公告）號: CN105660222B
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李巧云;姜玉梅;牛吉山;梁曉龍;孫玉龍;何瑞士;朱欣欣;于東艷
• 申請（專利權(quán)）人: 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;A01G7/06
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 李秋紅

1.一種能夠及時觀察小麥黑胚病癥狀的接種鑒定方法，其特征在于，所述接種鑒定方法包括以下步驟：

a、小麥穗部剪殼處理及雜菌隔離：在小麥抽穗后，將小麥穗上部及下部的小穗各去掉3個，將剩下小穗的穎殼從上面剪去1/2，并將麥芒剪掉，然后用硫酸紙袋將去殼的小麥穗罩上以隔離雜菌；

b、小麥黑胚病致病菌的培養(yǎng)：將小麥黑胚病致病菌接種于含有PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，在25℃條件下暗培養(yǎng)12天；

c、小麥黑胚病致病菌孢子懸浮液的制備：首先用無菌蒸餾水沖洗步驟b中PDA平板上培養(yǎng)得到的致病菌菌落，然后用紗布過濾至50mL的離心管中，在4℃、4000r/min的條件下離心5min，去上清液；接著加入10mL無菌蒸餾水搖勻再離心，去上清液；然后再加入5mL無菌蒸餾水，用血球計數(shù)板測定孢子濃度，根據(jù)測定的孢子濃度按比例加入無菌蒸餾水，調(diào)整至孢子濃度為3×10⁵個／mL，得到小麥黑胚病致病菌孢子懸浮液，于4℃冰箱保存?zhèn)溆茫?/p>

d、噴灑接菌及套袋保濕：在小麥籽粒滿仁時，將步驟c制備的孢子懸浮液搖勻后均勻噴灑在步驟a中剪殼處理的穗子上，噴灑后用塑料袋將穗子罩上保濕5天；

e、小麥黑胚病癥狀觀察：接菌后每天觀察步驟d接種處理籽粒上病菌的侵染情況以及籽粒黑胚病癥狀的形成；

f、鑒定結(jié)果記錄：小麥成熟時收獲晾干，將步驟d接種處理的穗子手工脫粒，統(tǒng)計黑胚病籽粒占籽粒總數(shù)的百分比即為黑胚率，作為小麥黑胚病鑒定的結(jié)果。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠及時觀察小麥黑胚病癥狀的接種鑒定方法，其特征在于：步驟b中所述小麥黑胚病致病菌為小麥根腐平臍蠕孢菌，狗牙根平臍蠕孢菌，蟋蟀草平臍蠕孢菌和草莖點霉菌中的至少一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠及時觀察小麥黑胚病癥狀的接種鑒定方法，其特征在于，步驟b中所述將小麥黑胚病致病菌接種于含有PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，具體操作過程為：首先將PDA培養(yǎng)基進行滅菌，然后冷卻至50～55℃時，在無菌條件下加入氨芐青霉素鈉，每100mL PDA培養(yǎng)基中氨芐青霉素鈉用量為100μL，搖勻后倒平板；待培養(yǎng)基凝固冷卻后，將小麥黑胚病致病菌菌落切成3mm²的小塊兒，放于平板的中央，1塊/皿。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的能夠及時觀察小麥黑胚病癥狀的接種鑒定方法，其特征在于，PDA培養(yǎng)基進行滅菌時的溫度為121℃，滅菌時間為20分鐘；所述氨芐青霉素鈉的濃度為100mg/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠及時觀察小麥黑胚病癥狀的接種鑒定方法，其特征在于，步驟d中所述小麥籽粒滿仁時，是指小麥籽粒發(fā)育為滿仁，即小麥籽粒有1/3～1/4伸出未剪掉穎殼的時間。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠及時觀察小麥黑胚病癥狀的接種鑒定方法，其特征在于：步驟e中接菌后每天觀察步驟d接種處理籽粒上病菌的侵染情況以及籽粒黑胚病癥狀的形成，根據(jù)浸染情況對小麥作出及時防治。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的能夠及時觀察小麥黑胚病癥狀的接種鑒定方法，其特征在于，步驟e中所述觀察采用兩種方法：一種是直接用肉眼觀察；另一種是分時間段取樣，制作切片用光學(xué)顯微鏡或掃描或透射電鏡觀察，以明確黑胚病致病菌的侵染途徑與小麥籽粒組織與菌互作時形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化。