[發(fā)明專利]摻雜熒光標(biāo)記生物高聚物及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610166061.4
• 申請(qǐng)日: 2016-03-22
• 公開（公告）號(hào): CN107219356A
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 安婧;李瀚;鄧橙;雷霆
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司;北京深邁瑞醫(yī)療電子技術(shù)研究院有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/533
• 分類號(hào): G01N33/533;G01N15/14
• 代理公司: 北京清亦華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11201
• 代理人: 李志東

1.一種摻雜熒光標(biāo)記生物高聚物，其特征在于，由以下部分組成：

生物高聚物；以及

多種熒光素，

其中，所述多種熒光素中的每一種各自獨(dú)立地與所述生物高聚物偶聯(lián)，且所述多種熒光素被選擇為適于發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移，

任選地，所述生物高聚物為蛋白質(zhì)、多肽、核酸或多糖。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的摻雜熒光標(biāo)記生物高聚物，其特征在于，所述多種熒光素中的每一種均不為熒光蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的摻雜熒光標(biāo)記生物高聚物，其特征在于，所述多種熒光素中的每一種均為小分子熒光素。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的摻雜熒光標(biāo)記生物高聚物，其特征在于，所述多種熒光素中的每一種各自獨(dú)立地具有選自異硫氰酸基、琥珀酰亞胺基、氟化苯基、硫代琥珀酰亞胺基、硫代四氟化苯基和氯化磺酰基的至少一種活性基團(tuán)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的摻雜熒光標(biāo)記生物高聚物，其特征在于，所述多種熒光素中的每一種各組獨(dú)立地選自Cyanine類熒光素和羅丹明類熒光素的至少一種，

任選地，Cyanine類熒光素為選自Cyanine3，Cyanine3.5，Cyanine5，Cyanine5.5和Cyanine7的至少一種，

任選地，羅丹明類熒光素為選自FITC，TRITC，Rhodamine B，Rhodamine 101，Rhodamine110，Rhodamine 123，Rhodamine 700，Rhodamine 800和Rhodamine 6G的至少一種，

任選地，所述生物高聚物為抗人CD4單克隆抗體或抗人CD3單克隆抗體，

任選地，所述多種熒光素為FITC和Cyanine5，

任選地，所述多種熒光素為Cyanine3和Cyanine5，

任選地，所述多種熒光素為FITC和Rhodamine B，

任選地，所述多種熒光素為FITC、Rhodamine B和Cyanine5。

6.一種制備摻雜熒光標(biāo)記生物高聚物的方法，其特征在于，包括：

將多種熒光素與待標(biāo)記生物高聚物混合，以便獲得所述摻雜熒光標(biāo)記生物高聚物，

其中，所述多種熒光素被選擇為適于發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，包括：

在4℃-35℃的溫度下，將所述多種熒光素與所述待標(biāo)記生物高聚物混合，并使所得到的混合物反應(yīng)10分鐘～4小時(shí)，

任選地，在15℃-30℃的溫度下，將所述多種熒光素與所述待標(biāo)記生物高聚物混合，并使所得到的混合物反應(yīng)20分鐘-2小時(shí)。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述混合是在pH為7.0～10.0的溶液中 進(jìn)行的，優(yōu)選地，所述溶液的pH為8.5～9.5。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述待標(biāo)記生物高聚物被預(yù)先溶解在緩沖液中，所述緩沖液的pH為7.0～10.0，優(yōu)選8.5～9.5，

其中，所述緩沖液為選自磷酸鈉緩沖液、碳酸鈉緩沖液、硼酸緩沖液的至少之一。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述待標(biāo)記生物高聚物在溶解得到的混合溶液中的濃度為3-7mg/mL，優(yōu)選5mg/mL，

任選地，所述多種熒光素中的每一種與所述待標(biāo)記生物高聚物的摩爾比為2:1-200:1，優(yōu)選5:1-50:1。

11.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述多種熒光素中作為熒光供體的熒光素與作為熒光受體的熒光素的摩爾比為1:50-50:1，優(yōu)選1:20-20:1，

任選地，所述待標(biāo)記生物高聚物為抗人CD4單克隆抗體或抗人CD3單克隆抗體，

任選地，所述多種熒光素為FITC和Cyanine5，

任選地，所述多種熒光素為Cyanine3和Cyanine5，

任選地，所述多種熒光素為FITC和Rhodamine B，

任選地，所述多種熒光素為FITC、Rhodamine B和Cyanine5。