[發(fā)明專(zhuān)利]肉鴨細(xì)小病毒精制卵黃抗體

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610164833.0
• 申請(qǐng)日: 2016-03-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105585632A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏思遠(yuǎn);趙光偉
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 重慶三杰眾鑫生物工程有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K16/08
• 分類(lèi)號(hào): C07K16/08;C07K16/02
• 代理公司: 重慶百潤(rùn)洪知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50219
• 代理人: 高姜

1.肉鴨細(xì)小病毒精制卵黃抗體，其特征在于，其制備流程包括以下：

第一步，將分離得到的肉鴨細(xì)小病毒經(jīng)易感鴨胚傳代12代獲得作為毒種， 然后將得到的肉鴨細(xì)小病毒用生理鹽水20000倍稀釋?zhuān)?jīng)尿囊腔接種11日 齡易感鴨胚，0.1ml/胚，收集接種60～120小時(shí)死亡鴨胚尿囊液，無(wú)菌檢驗(yàn) 合格后得到抗原；

第二步，抗原加終濃度為0.1％甲醛，37℃滅活24小時(shí)；于4℃經(jīng)4000轉(zhuǎn)/ 分鐘離心30分鐘，收集上清液，上清液用超濾器濃縮15倍，濃縮液轉(zhuǎn)入 滅菌容器滅活檢驗(yàn)合格后得到制備疫苗用抗原制備疫苗用抗原加入鴨白細(xì) 胞介素2，使鴨白細(xì)胞介素2終濃度為5μg/ml，即為鴨細(xì)小病毒白細(xì)胞介素 2佐劑滅活疫苗，無(wú)菌操作分裝，于2～8℃保存；

第三步，選取商品蛋雞進(jìn)行抗原接種和收集高免雞蛋，對(duì)高免雞蛋進(jìn)行消 毒、分離卵黃、抗體的萃取和過(guò)濾。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肉鴨細(xì)小病毒精制卵黃抗體，其特征在于：所述 第一步中得到的抗原，要進(jìn)行病毒含量、純凈性、特異性和免疫原性進(jìn)行鑒定。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肉鴨細(xì)小病毒精制卵黃抗體，其特征在于：抗原 用生理鹽水10倍系列稀釋?zhuān)?0^-5、10^-6和10^-73個(gè)稀釋度接種9日齡易感鴨胚， 每個(gè)稀釋度各接種5枚，每一胚胎0.1ml，用蠟封孔，于37.5℃靜置孵化，24 小時(shí)以前死亡的鴨胚棄去不計(jì)，收集24～168小時(shí)死亡鴨胚，按Reed-Muench 法計(jì)算病毒含量為10^-6.25ELD₅₀/0.1ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肉鴨細(xì)小病毒精制卵黃抗體，其特征在于：所述 免疫原性按如下進(jìn)行免疫接種：

對(duì)100～110日齡商品蛋30只進(jìn)行接種，同時(shí)設(shè)10只對(duì)照，不做任何處理， 免疫程序如下：

基礎(chǔ)免疫每只雞腿部肌肉注射1.0ml；

加強(qiáng)免疫在基礎(chǔ)免疫后21日進(jìn)行第2次接種，每只雞胸部肌肉注射 1.5ml；

強(qiáng)化免疫在加強(qiáng)免疫后15日進(jìn)行第3次接種，每只雞頸背部皮下注射 2.0ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的肉鴨細(xì)小病毒精制卵黃抗體，其特征在于：選取 100-120日齡蛋雞進(jìn)行滅火抗原接種：維持免疫：當(dāng)卵黃中鴨細(xì)小病毒瓊擴(kuò)抗體 效價(jià)臨界1:32時(shí)，維持接種1次，每只雞頸背部皮下注射疫苗2.0ml。強(qiáng)化免疫 后7日，抽樣取蛋，分離卵黃，提取抗體，檢測(cè)鴨細(xì)小病毒瓊擴(kuò)抗體效價(jià)大于 等于1:32為合格，收集高免雞蛋，8～12℃貯存，應(yīng)不超過(guò)10日。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肉鴨細(xì)小病毒精制卵黃抗體，其特征在于：充分 攪拌使卵黃呈均勻膏狀，裝入滅菌攪拌罐中，按體積比1:3加入25℃左右、PH 為4.7的滅菌注射用水，攪拌30分鐘，將卵黃液轉(zhuǎn)入不銹鋼桶中，加入終濃度 為4％正辛酸，繼續(xù)攪拌30分鐘，室溫放置12～24小時(shí)，用40目濾網(wǎng)撇去漂 浮在上層的蛋黃，用80目濾布過(guò)濾，收集濾液，濾出液和下層液體合并，用板 框過(guò)濾器加濾板和0.4微米濾膜過(guò)濾，然后轉(zhuǎn)入用0.2％甲醛溶液消毒的500L冰 柜中，4℃冷藏5小時(shí)，使殘留的辛酸結(jié)晶凝結(jié)析出，用80目濾網(wǎng)撇去浮在上 層的辛酸結(jié)晶，用0.2M氫氧化鈉溶液調(diào)pH7.0，再后用磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉 緩沖液調(diào)節(jié)pH6.9，即為抗體半成品。

7.根據(jù)權(quán)利要求7所述的肉鴨細(xì)小病毒精制卵黃抗體，其特征在于：抗體 半成品加入終濃度0.05％甲醛，用過(guò)濾精度0.2μm的筒式濾芯過(guò)濾除菌。