[發(fā)明專利]Citrin缺陷病致病基因SLC25A13高頻XIX型突變篩查引物及試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610162547.0
• 申請日: 2016-03-21
• 公開（公告）號: CN105695592A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發(fā)明（設計）人: 張占會;宋元宗
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉;陳燕嫻

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，特別涉及一種Citrin缺陷病致病基因SLC25A13 高頻XIX型突變篩查引物及試劑盒。

背景技術

Citrin蛋白是由SLC25A13基因編碼的一種位于線粒體內膜上的鈣調節(jié)載 體蛋白，主要在肝臟中表達。SLC25A13基因突變導致其所編碼的citrin蛋白功 能不足或喪失，引發(fā)一系列生化代謝紊亂，并最終形成臨床表型及預后各不相 同的以肝臟損害為突出臨床表現的常染色體隱性遺傳病-Citrin缺陷病(Citrin Deficiency，CD)。CD主要臨床表型可分為三種，分別為Citrin缺陷導致的新 生兒肝內膽汁淤積癥(NeonatalIntrahepaticCholestasiscausedbyCitrin Deficiency，NICCD，OMIM#605814)、成人發(fā)病瓜氨酸血癥II型(Adult-onset CitrullinemiaTypeII，CTLN2，OMIM#603471)和Citrin缺陷導致的生長發(fā)育 落后和血脂異常(FailuretoThriveandDyslipidemiacausedbyCitrinDeficiency， FTTDCD)。NICCD主要發(fā)病于新生兒或小嬰兒，以圓胖臉、肝大、黃疸及肝 功能異常為主要表現，若早期干預治療大部分預后良好；CTLN2主要發(fā)病于11 歲以上的兒童或是成人，以高氨血癥導致的神經精神癥狀為突出臨床表現，往 往預后不良，需要肝臟移植；FTTDCD是不同于NICCD及CTLN2的一種新 的臨床表現型，它主要表現為生長發(fā)育落后和血脂異常。

Citrin缺陷病的臨床表現復雜多樣，至今尚未建立成熟的臨床和生化診斷標 準，SLC25A13基因突變分析被認為是診斷該病的必要手段。在已發(fā)現的 SLC25A13基因突變類型中，I型(851del4)，III型(1638-1660dup)，X型 (c.615+5G>A)和XIX型(IVS16ins3kb)這四種突變類型為我國人群的高頻突 變類型。其中XIX型突變?yōu)榇笃尾迦胪蛔儯瑐鹘y(tǒng)的檢測方法主要是在插入位 點兩側設計引物，進行長片段PCR，然后電泳，如無XIX型突變則只擴增出一 條短帶，而XIX型純合子則擴增出一條長帶，長度是正常短帶長度加上插入片 段長度，而雜合子標本(一條染色體攜帶突變，而另外一條正常)則擴增出一 條短帶和一條長帶。這種方法需要使用LA-PCR技術，PCR運行時間長達7個 小時以上，且對操作者的要求較高，檢測實踐中經常出現假陰性而導致誤判漏 診。另外，有文獻報道使用套式PCR檢測XIX突變，兩條上游引物設計在插入 位點前正常序列，兩條下游引物設計在插入序列內，兩次擴增后電泳如果有目 的條帶則說明包含XIX型突變。這一種方法不能區(qū)別純合子與雜合子，且套式 PCR非常容易出現污染，導致假陽性結果。

發(fā)明內容

為了克服現有技術的缺點與不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種Citrin 缺陷病致病基因SLC25A13高頻XIX型突變篩查引物。本發(fā)明提供了全新設計 的三條引物，建立了依靠普通Taq酶的多重PCR體系，可以通過一次PCR和分 析電泳圖譜即可鑒定出樣本是XIX突變陰性、陽性還是雜合子，準確、簡單、 快速且費用低。

本發(fā)明的另一目的在于提供Citrin缺陷病致病基因SLC25A13高頻XIX型 突變篩查試劑盒。

本發(fā)明的目的通過下述技術方案實現：

Citrin缺陷病致病基因SLC25A13高頻XIX型突變篩查引物，所述的篩查引 物為：

MuXIX-2UF：5'-gccaaaccacttacagcggagt-3'；

MuXIX-2UR：5'-ttatgacagagagcagcactggttc-3'；

MuXIX-1R：5'-tccctacgacaacagagcattagc-3'；

正常基因擴增片段長度為335bp，突變后擴增片段長度為564bp。

一種Citrin缺陷病致病基因SLC25A13高頻XIX型突變篩查試劑盒，包括 上述三條引物(MuXIX-2UF、MuXIX-2UR和MuXIX-1R)、dNTPs、DNA聚合 酶、DNA聚合酶緩沖液組件。