[發(fā)明專利]一種重組流感病毒及其在抑制腫瘤細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)干擾素的產(chǎn)生中應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201610161687.6 | 申請(qǐng)日: | 2016-03-21 |
| 公開(公告)號(hào): | CN105754960B | 公開(公告)日: | 2019-04-09 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 劉文軍;李晶;江靜雯;范文輝;張爽 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 中國科學(xué)院微生物研究所 |
| 主分類號(hào): | C12N7/01 | 分類號(hào): | C12N7/01;C12N15/85;C12N15/57;C12N15/11;A61K35/768;A61P35/00 |
| 代理公司: | 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 | 代理人: | 關(guān)暢;何葉喧 |
| 地址: | 100101 北*** | 國省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 重組 流感病毒 及其 抑制 腫瘤 細(xì)胞 增殖 誘導(dǎo) 干擾素 產(chǎn)生 應(yīng)用 | ||
1.一種重組B型流感病毒,其特征在于:所述重組B型流感病毒是出發(fā)B型流感病毒的基因組進(jìn)行改造得到的;所述改造的實(shí)現(xiàn)方式為:用特異DNA分子取代所述出發(fā)B型流感病毒的基因組中的非結(jié)構(gòu)蛋白的編碼基因;
所述特異DNA分子中自上游至下游依次含有如下元件: NS1區(qū)段、caspase3-1的編碼基因、caspase3-2的編碼基因、豬捷申病毒核糖體stop/start 2A的結(jié)合位點(diǎn)的編碼基因和NEP區(qū)段;
所述NS1區(qū)段編碼氨基酸序列為序列表中序列10自N末端起第1至281位所示的蛋白質(zhì);
所述NEP區(qū)段編碼氨基酸序列為序列表中序列11自N末端起第23至144位所示的蛋白質(zhì);
所述出發(fā)B型流感病毒的基因組中的非結(jié)構(gòu)蛋白的編碼基因?yàn)樾蛄斜淼男蛄?所示的DNA分子;
所述重組B型流感病毒制備方法包括如下步驟:將質(zhì)粒pHH21-M、質(zhì)粒pHH21-PA、質(zhì)粒pHH21-PB1、質(zhì)粒pHH21-PB2、質(zhì)粒pHH21-HA、質(zhì)粒pHH21-NP、質(zhì)粒pHH21-NA和質(zhì)粒pHW2000-NS-caspase3共轉(zhuǎn)染離體的哺乳動(dòng)物細(xì)胞后培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞,得到重組病毒;
所述質(zhì)粒pHH21-M含有B型流感病毒的基因組中基質(zhì)蛋白的編碼基因;
所述質(zhì)粒pHH21-PA含有B型流感病毒的基因組中酸性聚合酶的編碼基因;
所述質(zhì)粒pHH21-PB1含有B型流感病毒的基因組中的聚合酶Ⅰ的編碼基因;
所述質(zhì)粒pHH21-PB2含有B型流感病毒的基因組中的聚合酶Ⅱ的編碼基因;
所述質(zhì)粒pHH21-HA含有B型流感病毒的基因組中的血凝素的編碼基因;
所述質(zhì)粒pHH21-NP含有B型流感病毒的基因組中的核蛋白的編碼基因;
所述質(zhì)粒pHH21-NA含有B型流感病毒的基因組中的神經(jīng)氨酸酶的編碼基因;
所述質(zhì)粒pHW2000-NS-caspase3含有所述特異DNA分子;
所述caspase3-1的氨基酸序列為序列表中序列10自N末端起第285至431位所示的亞基;
所述caspase3-2的氨基酸序列為序列表中序列10自N末端起第447至542位所示的亞基。
2.如權(quán)利要求1所述的重組B型流感病毒,其特征在于:
所述caspase3-1的編碼基因?yàn)樾蛄斜淼男蛄?自5’末端起第853至1293位所示的DNA分子;
所述caspase3-2的編碼基因?yàn)樾蛄斜淼男蛄?自5’末端起第1339至1629位所示的DNA分子。
3.如權(quán)利要求1所述的重組B型流感病毒,其特征在于:
所述NS1區(qū)段為序列表的序列1自5’末端起第1至843位所示的DNA分子;
所述NEP區(qū)段為序列表的序列1自5’末端起第1696至2064位所示的DNA分子。
4.如權(quán)利要求1-3任一所述的重組B型流感病毒,其特征在于:所述特異DNA分子為序列表的序列1所示的DNA分子。
5.權(quán)利要求1至4任一所述重組B型流感病毒在制備產(chǎn)品中的應(yīng)用;所述產(chǎn)品的功能為如下k1)至k5)中的至少一種:
k1)抑制腫瘤細(xì)胞增殖;
k2)殺傷腫瘤細(xì)胞;
k3)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡;
k4)誘導(dǎo)干擾素的產(chǎn)生;
k5)提高白介素的含量。
6.一種產(chǎn)品,包括權(quán)利要求1至4任一所述重組B型流感病毒;所述產(chǎn)品的功能為如下k1)至k6)中的至少一種:
k1)抑制腫瘤細(xì)胞增殖;
k2)殺傷腫瘤細(xì)胞;
k3)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡;
k4)誘導(dǎo)干擾素的產(chǎn)生;
k5)提高白介素的含量。
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