[發明專利]一種高效表達海腎熒光素酶基因的產品及其應用

有效

• 申請號: 201610161616.6
• 申請日: 2016-03-22
• 公開（公告）號: CN105671006B
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 譚文杰;申梁
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/62;C12Q1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種高效表達海腎熒光素酶基因的能夠用于高通量篩選抗病毒藥物的產品，其特征在于：海腎熒光素酶基因替換人冠狀病毒OC43附屬基因ns2編碼區內第19位堿基到第714位堿基，并保留715-837位的堿基序列，所述海腎熒光素酶基因含終止密碼子，所述人冠狀病毒OC43為ATCC VR-759，GenBank accession number AY585228。

2.根據權利要求1所述的產品的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)擴增海腎熒光素酶基因；

(2)分別擴增冠狀病毒OC43第18566-21523位堿基之間的基因片段和第22222-23934位堿基之間的基因片段；

(3)通過重疊PCR將步驟(1)和(2)所擴增的3個基因片段融合，獲得融合片段Rluc-2；

(4)將步驟(3)獲得的融合片段Rluc-2克隆至人冠狀病毒OC43全長感染性克隆中構建得到攜帶Rluc基因的人冠狀病毒OC43全長感染性克隆質粒；

(5)將重組冠狀病毒OC43全長感染性克隆質粒轉染BHK-21細胞，將細胞傳代后，收獲病毒，即得。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟(4)中所用人冠狀病毒OC43全長感染性克隆為pBAC-OC43^FL。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟(4)中用NarI和PmeI雙酶切融合片段Rluc-2和人冠狀病毒OC43全長感染性克隆pBAC-OC43^FL。

5.權利要求1所述的產品在高通量篩選抗冠狀病毒藥物實驗中的應用。