[發(fā)明專利]一種高效表達(dá)海腎熒光素酶基因的產(chǎn)品及其應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610161616.6 | 申請日： | 2016-03-22 |
| 公開（公告）號： | CN105671006B | 公開（公告）日： | 2021-08-27 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 譚文杰;申梁 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所 |
| 主分類號： | C12N7/01 | 分類號： | C12N7/01;C12N15/62;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 102206 北京市昌平*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 高效 表達(dá) 熒光 基因 產(chǎn)品 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種高效表達(dá)海腎熒光素酶基因的能夠用于高通量篩選抗病毒藥物的產(chǎn)品，其特征在于：海腎熒光素酶基因替換人冠狀病毒OC43附屬基因ns2編碼區(qū)內(nèi)第19位堿基到第714位堿基，并保留715-837位的堿基序列，所述海腎熒光素酶基因含終止密碼子，所述人冠狀病毒OC43為ATCC VR-759，GenBank accession number AY585228。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的產(chǎn)品的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)擴(kuò)增海腎熒光素酶基因；
(2)分別擴(kuò)增冠狀病毒OC43第18566-21523位堿基之間的基因片段和第22222-23934位堿基之間的基因片段；
(3)通過重疊PCR將步驟(1)和(2)所擴(kuò)增的3個基因片段融合，獲得融合片段Rluc-2；
(4)將步驟(3)獲得的融合片段Rluc-2克隆至人冠狀病毒OC43全長感染性克隆中構(gòu)建得到攜帶Rluc基因的人冠狀病毒OC43全長感染性克隆質(zhì)粒；
(5)將重組冠狀病毒OC43全長感染性克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞，將細(xì)胞傳代后，收獲病毒，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟(4)中所用人冠狀病毒OC43全長感染性克隆為pBAC-OC43FL。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟(4)中用NarI和PmeI雙酶切融合片段Rluc-2和人冠狀病毒OC43全長感染性克隆pBAC-OC43FL。
5.權(quán)利要求1所述的產(chǎn)品在高通量篩選抗冠狀病毒藥物實驗中的應(yīng)用。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所，未經(jīng)中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
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