[發明專利]食品中潛在過敏原的篩選方法

在審

• 申請號: 201610160226.7
• 申請日: 2016-03-21
• 公開（公告）號: CN105738550A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發明（設計）人: 祁艷霞;高慶歷;于洋;趙前程;李智博;宋楊
• 申請（專利權）人: 大連海洋大學;祁艷霞
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 大連格智知識產權代理有限公司 21238
• 代理人: 劉曉琴

技術領域

本發明涉及食品中過敏原評估檢測方法，屬檢驗檢疫領域。

背景技術

食品過敏指的是人體免疫系統對食品中的某種物質產生了免疫反應，包括抗體的釋放，而這些抗體又引起人體內某些化學物質釋放，例如組胺會引起皮膚發癢、流鼻涕、咳嗽、呼吸困難，甚至導致死亡(張瑞灝等，中國檢驗檢疫，2009，3:22)。除牛奶、蛋類以及堅果等常見的陸地食物過敏原外，魚類等水產品過敏原同樣占據了非常大的比重。在發達國家，對魚類過敏的人群約占總人群的0.1～0.3％(ZhangW.,etc,FoodChemistry2015,174:547.)。在我國，水產品和雞蛋、牛奶等都是引起食物過敏的主要原因，在對在校大學生食物過敏的流行病學研究表明，魚類是最主要的致敏食物之一，占過敏患者總數的18.2％。(呂相征等，中國食品衛生雜志2005,17:119)。然而現有技術中明確鑒定的過敏原數量非常有限。以魚類過敏原的鑒定為例，目前已發現并鑒定的魚類過敏原只有如小清蛋白、魚卵蛋白、膠原蛋白以及肌鈣蛋白等數種機體表達極為豐富的組織蛋白，除此以外，可能還存在大量的表達豐度低，但活性非常強烈的魚類過敏原，這極大地增加了魚類過敏原檢測、診斷以及治療的難度(BredehorseR.,etc,JournalofChromatographyB2001,756:33.)。目前，確定魚類食品中潛在蛋白質過敏原還沒有成熟可靠的方法。2001年3月，聯合國糧農組織(FAO)與世界衛生組織(WHO)修訂并提出了一種“樹狀評價模式”對目標蛋白質進行過敏原性評價(FAO/WHO.FoodandAgricultureOrganizationoftheUnitedNations(FAO),Rome,Italy2001,27)。FAO/WHO“評估樹”從新蛋白一級結構氨基酸序列開始分析，確定其與已知過敏原的序列同源性，如果這樣的評價不能提供潛在過敏性的證據，則進一步對該蛋白質進行特異血清和消化穩定性實驗。但是由于該法工作量較大(需要提純一定量的目標蛋白質，測定其氨基酸序列)，而且已知的過敏原大約只有500多種，限制了該方法的準確性及其應用。此外，利用已知過敏病人血清進行體外檢測，由于過敏病例血清樣品數目有限，所得到的結論不完全可靠。同樣，其它諸如雞蛋、牛奶、堅果等食品中的過敏原篩選檢測也存在同樣的問題。

Astwood等人發現食品中的大部分過敏原具有含量高、對酶和化學降解具有抗性等特點，在體內胃液酸性環境中很難被胃蛋白酶水解(AstwoodJ.D.,ect,NatureBiotechnology1996,14:1269)該發現為食品潛在過敏原的篩選提供了一個有益的思路，本發明即基于此。

發明內容

本發明旨在提供一種簡單易行的檢測食品食品潛在過敏原的方法，以提高對食品安全性的評估效率，達到對食品安全控制的作用。

為了實現上述目的，本發明提供一種食品中潛在過敏原的篩選方法，是將食品蛋白與體外模擬消化液混合后，以SDS-PAGE電泳分析不同消化時間條件下的消化產物；選取耐酶解條帶進行膠內酶解，所得肽段采用液相色譜-質譜聯用鑒定分析，并結合蛋白質數據庫和過敏原數據庫，確定致敏蛋白質種類及其過敏性。

本發明的方法無需預先純化目標蛋白質，操作簡單，結果顯著，且可信度高，重復性強。該方法不僅能夠檢測食物的過敏原，還能夠評估耐酶解蛋白質的過敏性。方法簡便易行，可以同時檢測多個樣品，易于實現高通量篩選，符合食品檢測領域準確高效的需求。

附圖說明

本發明附圖3幅，分別是：

圖1是大黃魚蛋白質的模擬胃液消化產物的SDS-PAGE電泳圖。

圖2是鲅魚蛋白質的模擬胃液消化產物的SDS-PAGE電泳圖。

圖3是雞蛋清蛋白質的模擬胃液消化產物的SDS-PAGE電泳圖。

具體實施方式

本發明所述的食品中潛在過敏原的篩選方法，是將食品蛋白與體外模擬消化液混合后，以SDS-PAGE電泳分析不同消化時間條件下的消化產物；選取耐酶解條帶進行膠內酶解，所得肽段采用液相色譜-質譜聯用鑒定分析，并結合蛋白質數據庫和過敏原數據庫，確定致敏蛋白質種類及其過敏性。

其中，所述的體外模擬消化液優選體外模擬胃液或體外模擬腸液。在食品蛋白與體外模擬消化液混合過程中，優選控制所述的體外模擬消化液中的酶與食品蛋白的質量比是1:40～60。

再者，其中所述的食品蛋白是采用等電點沉淀法、緩沖鹽提取法或有機溶劑提取法從食物樣品中提取，并經冷凍干燥處理的混合蛋白樣品。