[發明專利]食品中潛在過敏原的篩選方法

在審

• 申請號: 201610160226.7
• 申請日: 2016-03-21
• 公開（公告）號: CN105738550A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發明（設計）人: 祁艷霞;高慶歷;于洋;趙前程;李智博;宋楊
• 申請（專利權）人: 大連海洋大學;祁艷霞
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 大連格智知識產權代理有限公司 21238
• 代理人: 劉曉琴

1.食品中潛在過敏原的篩選方法，是將食品蛋白與體外模擬消化液混合后，以SDS-PAGE電泳分析不同消化時間條件下的消化產物；選取耐酶解條帶進行膠內酶解，所得肽段采用液相色譜-質譜聯用鑒定分析，并結合蛋白質數據庫和過敏原數據庫，確定致敏蛋白質種類及其過敏性。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的體外模擬消化液是體外模擬胃液或體外模擬腸液。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的體外模擬消化液中的酶與食品蛋白的質量比是1:40～60。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的致敏蛋白質種類及其過敏性的判斷標準包括：待測蛋白質的氨基酸序列采用生物信息學的方法與已知過敏原進行比對：如果待測蛋白質至少6個連續的氨基酸與已知過敏原氨基酸序列相同；或長度至少為80個氨基酸的序列與過敏原蛋白質的相似性在35％以上，該判定該待測蛋白質具有潛在過敏性。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的食品蛋白是采用等電點沉淀法、緩沖鹽提取法或有機溶劑提取法從食物樣品中提取，并經冷凍干燥處理的混合蛋白樣品。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的食品蛋白是魚源性食品蛋白。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述的體外模擬消化液是含有胃蛋白酶的體外模擬胃液，胃蛋白酶與食品蛋白的質量比是1:50。

8.魚源性食品中潛在過敏原的篩選方法，包括如下步驟：

(1)提取食品蛋白；

(2)將步驟1所提取的食品蛋白與含有胃蛋白酶的體外模擬胃液混合，使胃蛋白酶與食品蛋白的質量比是1:50；

(3)消化反應在37℃條件下震蕩進行，分別在消化反應0、2、10、30、60、90和120分鐘，進行SDS-PAGE電泳分析；

(4)按照反應120分鐘時的SDS-PAGE電泳分析結果，選擇47kD，42kD和12kD條帶的蛋白質條帶為耐酶解條帶；

(5)對選定的耐酶解條帶進行膠內酶解：首先向蛋白條帶中加入脫色液振蕩脫色，縮干膠條，繼而加入DTT溶液，振蕩反應；然后加入IAA溶液，室溫黑暗條件下反應后，加入胰蛋白酶溶液酶解；上清液真空干燥，所得產物復溶后待分析；

(6)經步驟(5)酶解后的肽段以液相色譜-質譜進行分析：

液相色譜C18AQ，3μm，12cm，分流后的流速200nl/min；離子傳輸毛細管的溫度設置為200℃，電噴霧電壓設置為1.8kV；

數據采集每個循環包括1個MS全掃描和10個MS/MS質譜掃描；

(7)耐酶解蛋白質與已知過敏原氨基酸序列比對在NCBI/blast數據庫中進行，根據比對結果判定致敏蛋白質種類及其過敏性。