[發明專利]高效氯氟氰菊酯半抗原的制備方法及應用

在審

• 申請號: 201610159906.7
• 申請日: 2016-03-21
• 公開（公告）號: CN105732788A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發明（設計）人: 馮才偉;汪善良;扶勝;蔡韜;陸葦;謝體波;劉紅;李平;王大敏;牛治存
• 申請（專利權）人: 貴州勤邦食品安全科學技術有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/765;G01N33/68;G01N33/531
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技術領域

本發明涉及一種高效氯氟氰菊酯殘留的半抗原的制備方法及應用。

背景技術

高效氯氟氰菊酯，英文名Lambda-Cyhalothrin，又稱為愛克寧、λ-三氟氯氰菊酯，屬擬除蟲菊酯類，具有觸殺作用的衛生殺蟲劑，化學名稱：α-氰基-3-苯氧芐基-3-(2-氯-3,3,3-三氯氟-1-丙烯基)-2,2-二甲基環丙烷羧酸酯(Z)-(1R,3R),S-酯及(Z),(1S,3S),R-酯的1:1混合物。具有觸殺作用，是對環境衛生害蟲極為有效的一種廣效殺蟲劑，具有擊倒速度快、擊倒力強，用藥量少等優點。能消滅傳播疾病的媒介害蟲和防治各種衛生害蟲。擬除蟲菊酯類被稱為是殺蟲劑農藥的一個新突破，是殺蟲劑歷史上的第三個里程碑。在農業生產上，用途廣泛。

高效氯氟氰菊酯屬于神經毒劑，接觸量大時會引起頭痛、頭暈、惡心、嘔吐、雙手顫抖，全身抽搐或驚厥、昏迷、休克等，故國家制定了嚴格的高效氯氟氰菊酯殘留檢測標準，以保障食品安全，消除潛在的食品安全隱患。如GB/T5009-2008《植物性食品中有機氯和擬除蟲菊酯類農藥多種殘留的鑒定》、GB/T19649-2006《糧谷中475種農藥及相關化學平殘留量的測定》、SN/T1117-2008《進出口食品中多種菊酯類農藥殘留量測定方法氣相色譜法》，現行的殘留檢測方法是氣相色譜法和高效液相色譜法，該方法依賴于大型儀器和專業技術檢測人員，檢測時間長，需要使用有機溶劑，會造成環境污染。尋求一種快速、有效、準確的檢測方法和手段，勢在必行。酶聯免疫檢測方法具有靈敏度好、精確度高、檢測成本低、操作簡單、檢測時間短、可實現多樣本同時檢測的特點，在食品安全快速檢測中發揮重要的作用。

高效氯氟氰菊酯是農藥小分子化合物，必須與大分子物質連接后才能刺激動物產生特異性抗體，故酶聯免疫技術研究的關鍵是半抗原的分子設計、合成和人工抗原及抗體的制備。擬除蟲菊酯農藥半抗原設計與合成主要有如下方法：1）以擬除蟲菊酯的酸或醇部分衍生化作為半抗原；2）改變擬除蟲菊酯分子的活性基團作為半抗原。半抗原就是在無免疫原性的化合物母體結果上通過一定的化學方法連接一個具有一定碳鏈長度的間隔臂，間隔臂的另一端具有可與載體蛋白質共價偶聯的活性基團（如羧基、氨基、羥基等）的小分子物質。半抗原的設計應考慮結構中盡量保留芳香環。

國內外對擬除蟲菊酯類的研究較多且已有不少成果報道，如王利兵等人申請了發明專利《一種功夫菊酯半抗原的合成方法》（專利號：201110271124.X），該專利是以羥基苯丙酸作為原料，經過七步反應得到半抗原；中國農業大學許艇等人申請了發明專利《功夫菊酯殘留的間接競爭酶聯免疫吸附分析試劑盒》（專利號：200810101544.1），以羥基苯丙酸為原料，經六步反應，獲得半抗原3-[(±)-(cis)-3-[(Z)-3-氯-4,4,4-三氟-1-乙基-2,2-二甲基]環丙基羰基氧]苯氧基]苯丙酸，上述兩個技術方案，存在反應步驟多，轉化率相關較低，得到的副產物較多，后續純化工作量大的缺點。浙江大學程敬麗等人，申請了發明專利《一種高特異性擬除蟲菊酯類半抗原化合物》（專利號：200810162533.4），以氯氰菊酯為原料，經調節pH至酸性、提取、水洗和純化反應，得到半抗原化合物，（RS）-α-氰基-3-苯氧基苯基（RS）-順,反-2,2-二甲基-3-羧基環丙烷碳酸酯，該專利是針對擬除蟲菊酯類設計的半抗原合成路線，而不是針對單一菊酯產品的半抗原合成。福建出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心，獲得了發明專利《擬除蟲菊酯類農藥殘留的快速檢測方法》（專利號：200410155382.1）的授權，該專利利用強堿試劑將檢測物中的擬除蟲菊酯農藥殘留分解成含氰化合物，該發明使用強酸強堿試劑，且生成物為含氰化合物，有毒且對環境不友好。

李志茹優秀碩士畢業論文，《擬除蟲菊酯類農藥通用抗體制備及高效氯氟氰菊酯免疫檢測技術研究》，研究以擬除蟲菊酯農藥的中間體-間苯氧基苯甲酸為半抗原、菊酸為主要原料，獲得多克隆通用抗體。

北京勤邦生物技術有限公司申請了一項發明專利，《三聚氰胺半抗原及其制備方法和應用》（專利號：201110356771.0），該專利以三聚氰酸二酰胺與琥珀酸酐進行反應，制備得到三聚氰胺半抗原，制備出三聚氰胺快速檢測試劑盒和試紙條，解決了三聚氰胺的快速檢測。

針對目前現有技術方案的不足，本發明擬提供一種專門針對高效氯氟氰菊酯殘留檢測的半抗原合成方案，以半抗原為基礎與載體蛋白偶聯成抗原，從而進行免疫反應實驗，經篩選獲得單克隆抗體，具有經濟、環保、特異性強的優點。

發明內容