[發明專利]一種百蕊草組培瓶苗的育苗方法

有效

• 申請號: 201610157666.7
• 申請日: 2016-03-21
• 公開（公告）號: CN105580737B
• 公開（公告）日: 2018-05-01
• 發明（設計）人: 黃燕芬;何軍;王自布;劉向陽;曹永高
• 申請（專利權）人: 貴州師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標事務有限公司52002
• 代理人: 袁慶云

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種百蕊草組培瓶苗的育苗方法。

背景技術

百蕊草( Thesium Chinense Turcz ) 為檀香科植物，全草入藥，具清熱解毒、補腎澀精作用，治急性乳腺炎、肺炎、肺膿腸、扁桃體炎、上呼吸道感染、腎虛腰痛、頭暈遺精、滑精，為目前急缺的廣譜抗菌中草藥。百蕊草中百蕊草素含量較高，且容易分離提取，所以是較好的百蕊草素生產原材料。百蕊草為半寄生植物，離開寄主植物不能獨立生存，近年來，隨著寄主植物的逐漸減少，百蕊草產量逐年減少，因此收購價格不斷上漲，現有的野生資源已難以滿足市場的需求。

研究表明，組織培養生產的百蕊草和野生百蕊草具有相同的藥效，使用組培苗完全可以替代野生苗。所以規模化生產組培苗是解決資源匱乏的有效途徑。雖然利用組織培養技術進行快速繁殖方面的研究，如：袁藝（激光生物學報，2002年）等人通過對百蕊草組織培養的培養基種類、激素配比、添加物汁液、碳源的研究，得出適合百蕊草側芽分化生長的最佳培養基為MS + 6-BA2. 0mg / L + NAA0. 5mg / L+ 狗牙根汁液。誘導愈傷組織以2,4-D 濃度在0. 5mg / L-2mg / L 之間最佳。碳源以蔗糖，濃度3%最佳。生根實驗表明：較低濃度的生長素不利于生根，最佳生根培養基為MS + 6-BA0. 5mg/ L+ NAA2m g/ L+ 狗牙根汁液或MS + 6- BA0.5mg / L+ IBA 2mg / L + 狗牙根汁液；江芹等人得出叢生芽的誘導最佳培養基為MS + 6-BA 1.5mgL+NAA 0.01 mg/L+2,4-D 0.3 mg/L。最適繼代培養基以MS + 6-BA(0.5—1.0 mg/L) + NAA 0.0l mg/L，組織培養程序無需添加其他寄主植物的提取液，60 ml/kg的生根水誘導試管苗生根效果最好。

但還存在移栽成活率低下的問題，并且人工栽培組培苗和實生苗都存在需要寄主植物寄生，百蕊草產量低（每年畝產約5-7公斤），只能廣種薄收，與糧爭地的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種具有增殖速度快，生產周期短，不受季節限制，連續生產等優勢，不占用耕地，能實現規?；a的百蕊草組培瓶苗的育苗方法。

本發明的一種百蕊草組培瓶苗的育苗方法，包括以下步驟：

（1）外植體的獲得

取春季野生百蕊草植株幼嫩健壯枝條在自來水下沖洗干凈，作表面消毒后，在無菌條件下將葉片表面劃傷，剪成長度約為1cm小段；

（2）愈傷組織的誘導及繼代培養

將剪切好的葉片接種于誘導愈傷組織培養基上，在溫度為24±1℃、光照培養條件為1500-2000Lx 的條件下培養誘導，葉片周圍迅速膨脹，誘導出愈傷組織，誘導率可達100%，所誘導的愈傷組織絕大多數為質地疏松的淡黃色或淡綠色愈傷組織；3 周后將誘導出的具有穩定形態特征和生長速率的愈傷組織轉到新鮮培養基上繼代培養，每2周繼代一次；

(3)無根苗誘導及快速繁殖

繼代培養所獲愈傷組織經光培養分化增殖至30d時，用MS固體培養基于溫度23-25℃、光照時間12-16h/d、光照強度2000-3000Lx誘導培養15-20d后，可在愈傷組織表層或稍深層形成并分化出百蕊草無根苗；將誘導出的無根苗切成單苗，接種于增殖培養基于溫度23-25℃、光照時間12-16h/d、光照強度2000-3000Lx進行增殖培養，經26天培養增殖系數為8.5；

(4)壯苗培養

快繁獲得的百蕊草無根苗較纖細，需經壯苗培養基作壯苗培養，培養溫度為23-25℃、光照時間為12-16h/d、光照強度為2000-3000Lx；壯苗培養15天后，葉片增厚、增寬，莖干增粗，幼苗健壯，色澤正常，洗去附著莖基部附著培養基，攤涼3天即可作為原料提取百蕊草素。

上述的一種百蕊草組培瓶苗的育苗方法，其中：所述的誘導愈傷組織培養基的組成為：在常規的MS 培養基中加入30g/L 的蔗糖，0.7% 的瓊脂，2mg/L 的谷氨酰胺，0.05-0.15mg/L 的NAA，0.1-0.3mg/L的2,4-D，0.5-2.0mg/L的6-BA，10mg/L的AgNO3，pH 調為5.8-6.2；

上述的一種百蕊草組培瓶苗的育苗方法，其中：所述MS固體培養基由0.5-1.5mg/L的NAA,0.5-1.5mg/L的6-BA。