[發明專利]一種百蕊草組培瓶苗的育苗方法

有效

• 申請號: 201610157666.7
• 申請日: 2016-03-21
• 公開（公告）號: CN105580737B
• 公開（公告）日: 2018-05-01
• 發明（設計）人: 黃燕芬;何軍;王自布;劉向陽;曹永高
• 申請（專利權）人: 貴州師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標事務有限公司52002
• 代理人: 袁慶云

1.一種百蕊草組培瓶苗的育苗方法，包括以下步驟：

（1）外植體的獲得

取百蕊草幼嫩枝條在自來水下沖洗干凈，接著用75% 酒精表面消毒30-40s，再在0.1% 升汞溶液中滅菌6-7min，用無菌水漂洗3-5 次，最后在無菌條件下將葉片剪成四周有傷口長約1cm的小段；

（2）愈傷組織的誘導及繼代培養

將剪切好的葉片接種于誘導愈傷組織培養基上，在溫度為24±1℃、光照培養條件為1500-2000Lx 的條件下培養誘導，葉片周圍迅速膨脹，誘導出愈傷組織，誘導率達100%，所誘導的愈傷組織絕大多數為質地疏松的淡黃色或淡綠色愈傷組織；3 周后將誘導出的具有穩定形態特征和生長速率的愈傷組織轉到新鮮培養基上繼代培養，每2周繼代一次；

所述的誘導愈傷組織培養基的組成為：在常規的MS 培養基中加入30g/L 的蔗糖，0.7% 的瓊脂，2mg/L 的谷氨酰胺，0.05-0.15mg/L 的NAA，0.1-0.3mg/L的2,4-D，0.5-2.0mg/L的6-BA，10mg/L的AgNO3，pH 調為5.8-6.2；

在誘導愈傷組織的步驟中，2,4-D對百蕊草愈傷組織有強的誘導作用，以0.1- 0.3mg/L的2,4-D誘導的出愈率較高，且生長狀況好，0.05-0.15mg/L的NAA誘導的愈傷組織生長好，有光澤，培養基中6-BA的濃度為0.5-2.0mg/L時出愈率高，愈傷組織生長好；

(3)無根苗誘導及快速繁殖

繼代培養所獲愈傷組織經光培養分化增殖至30d時，用MS固體培養基于溫度23-25℃、光照時間12-16h/d、光照強度2000-3000Lx

誘導15-20d后，在愈傷組織表層或稍深層形成并分化出百蕊草無根苗，將誘導出的無根苗切成單苗，接種于增殖培養基于溫度23-25℃、光照時間12-16h/d、光照強度2000-3000Lx進行增殖培養，經26天培養增殖系數為8.5；

所述MS固體培養基以MS為基本培養基，附加0.5-1.5mg/L的NAA,0.5-1.5mg/L的6-BA；增殖培養基以MS為基本培養基，附加0.8-1.7mg/L的NAA、0.4-1.0mg/L的6-BA，兩種培養基均附加0.7% 的瓊脂，質量分數為3% 的蔗糖，pH調至5.8-6.2 ；

(4)壯苗培養

快繁獲得的百蕊草無根苗較纖細，以MS + 0.5-1.5mg/LNAA + 0.7% 瓊脂 + 3% 蔗糖，pH調至5.8-6.2 的壯苗培養基作壯苗培養，培養溫度為23-25℃、光照時間為12-16h/d、光照強度為2000-3000Lx；壯苗培養15天后，葉片增厚、增寬，莖干增粗，幼苗健壯，色澤正常，洗去附著莖基部附著培養基，攤涼3天即可作為原料提取百蕊草素。

2.如權利要求1所述的一種百蕊草組培瓶苗的育苗方法，其中：采用愈傷組織途徑建立無性系，為防止產生變異增殖7-8代后需重新誘導建立無性系。