[發(fā)明專利]完全不動(dòng)精子的生育力保存方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201610157472.7
• 申請日: 2016-03-18
• 公開（公告）號: CN105660607A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馮貴雪;陳煥華;張波;周紅;汪彩珠;舒金輝;林若蕓;甘賢優(yōu)
• 申請（專利權(quán)）人: 馮貴雪;廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種完全不動(dòng)精子的生育力保存方法，其特征是：由以下步驟構(gòu)成：

①完全不動(dòng)精子冷凍方法：

收集完全不動(dòng)精子后，取小部分出來，用激光鑒定如有存活的精子即判為可冷凍保存， 若無存活精子，則廢棄；將剩余精液吸至100～200μL(微升)，放入專用微量精子冷凍管內(nèi)， 直接用低轉(zhuǎn)速的離心機(jī)離心；離心后去除上清液，然后再加入與精子沉淀1∶1體積的精子冷凍 液，混勻，使最終懸液的總體積為10μL；將裝有精子懸液的冷凍管置于距液氮面2-3cm處， 熏蒸3～5min，然后直接投入液氮中冷凍保存；解凍時(shí)，直接將冷凍管投入到預(yù)熱好的37℃的 水浴中，放置10min；最后將精子懸液吸出，放置于培養(yǎng)皿中，加入少許培養(yǎng)液稀釋后備ICSI 即卵胞漿內(nèi)單精子注射；

②完全不動(dòng)精子冷凍前、后精子存活狀態(tài)的評估：

將獲取的不動(dòng)精子加入到Quinn’s-1020即受精液操作皿中，在視野下選擇形態(tài)較好的精 子，在精子尾部靠近尾巴尖端處，用1.48μm(微米)的二極管激光束照射精子尾部中下段， 照射時(shí)間為2ms(毫秒)，如果激光射擊后，精子尾部立即出現(xiàn)明顯的卷尾現(xiàn)象，則判定為存 活精子，對激光射擊無反應(yīng)不發(fā)生卷尾的為死精子；冷凍前和復(fù)蘇后分別計(jì)算不動(dòng)精子的存 活率，以冷凍后的存活指數(shù)，來評價(jià)完全不活動(dòng)精子的冷凍效果；

對完全不動(dòng)精子的微量冷凍，其最終精子冷凍懸液的總體積僅為10μL；

上述的對完全不動(dòng)精子冷凍前、冷凍后的存活情況應(yīng)用激光進(jìn)行鑒定。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種完全不動(dòng)精子的生育力保存方法，其特征在于：所述的存 活指數(shù)是冷凍后的存活率/冷凍前的精子存活率。