[發明專利]一種針對前列腺特異抗原的檢測方法

有效

• 申請號: 201610156409.1
• 申請日: 2016-03-18
• 公開（公告）號: CN105785019B
• 公開（公告）日: 2017-11-21
• 發明（設計）人: 熊勇華;黃小林;許恒毅;陳銳;梁毅;湛勝楠;裴可;熊穎;段宏;鄭玲燕;周耀峰
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/573
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司36115
• 代理人: 施秀瑾

1.一種針對前列腺特異抗原的非診斷目的的檢測方法，該方法屬于雙抗夾心酶聯免疫法，該方法是針對前列腺特異抗原的檢測，該方法中用于標記抗體的酶是觸酶C100，該方法中底物包括雙氧水和巰基丙酸修飾的碲化鎘量子點。

2.根據權利要求1所述的針對前列腺特異抗原的非診斷目的的檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

1)包被前列腺特異抗原抗體；

2)取步驟1)包被后的抗體，與待測樣品混合后于35～39℃避光環境中反應40～80min，洗滌；

3)而后加入生物素化的前列腺特異抗原單克隆抗體混合，于35～39℃避光環境中反應40～80min，洗滌；

4)而后加入鏈霉親和素標記的觸酶C100混合，于35～39℃避光環境中反應40～80min，洗滌；

5)而后加入濃度為8～12μmol/L的雙氧水溶液混合，于35～39℃避光環境中反應20～40min；

6)而后加入巰基丙酸修飾的碲化鎘量子點混合，于室溫避光環境中反應10～20min；

7)檢測步驟6)產物的熒光強度。

3.根據權利要求2所述的針對前列腺特異抗原的非診斷目的的檢測方法，其特征在于步驟1)具體包括以下操作：

A)在酶標板上以0.04～0.06mol/L、pH9.4～9.8的碳酸鹽緩沖液作為包被液，稀釋前列腺特異抗原多克隆抗體至9～11μg/mL；

B)去除酶標板上的液體后利用洗滌液洗滌酶標板，再加入牛血清白蛋白封閉液，于35～39℃封閉1～3h，而后棄去封閉液。

4.根據權利要求3所述的針對前列腺特異抗原的非診斷目的的檢測方法，其特征在于步驟A)中包被液的加入量為80～120μL/孔，稀釋后靜置8～12h再執行步驟B)。

5.根據權利要求2所述的針對前列腺特異抗原的非診斷目的的檢測方法，其特征在于步驟3)所述生物素化的前列腺特異抗原單克隆抗體是通過以下方法制備的：配制含有1～3mg/mL前列腺特異抗原單克隆抗體、0.07～0.08mg/mL生物素的PBS溶液，于避光條件下反應30～60min，所述PBS溶液的濃度為0.005～0.02mol/L，而后透析去除生物素，即得到所述生物素化的前列腺特異抗原單克隆抗體。

6.根據權利要求2所述的針對前列腺特異抗原的非診斷目的的檢測方法，其特征在于步驟4)所述鏈霉親和素標記的觸酶C100是通過以下方法制備的：配制含有0.5～2mg/mL鏈霉親和素的PBS溶液，所述PBS溶液的濃度為0.005～0.02mol/L，而后加入SM(PEG)₂₄反應30～60min，而后凝膠柱純化，收集濾液向其中加入觸酶C100至終濃度1～3mg/mL，即得到所述鏈霉親和素標記的觸酶C100。

7.根據權利要求2所述的針對前列腺特異抗原的非診斷目的的檢測方法，其特征在于步驟6)所述巰基丙酸修飾的碲化鎘量子點是通過以下方法制備的：配制含有8～12mmol/L硝酸鎘、20～28mmol/L巰基丙酸、3～7mmol/L碲氫化鈉的溶液即為前體溶液，所述前體溶液的pH為11～11.5，將所述前體溶液水浴加熱至93～97℃，即得到所述巰基丙酸修飾的碲化鎘量子點。

8.根據權利要求2所述的針對前列腺特異抗原的非診斷目的的檢測方法，其特征在于步驟7)中熒光強度的檢測是利用酶標儀實現的，激發波長為310nm，發射波長為590nm。