[發明專利]一種阿達木單抗的陽離子交換色譜純化方法

有效

• 申請號: 201610156287.6
• 申請日: 2016-03-18
• 公開（公告）號: CN105777903B
• 公開（公告）日: 2018-04-27
• 發明（設計）人: 洪艷;楊彬;馬旭通;林小鵲;李文佳;孫文正
• 申請（專利權）人: 廣東東陽光藥業有限公司
• 主分類號: C07K16/24
• 分類號: C07K16/24;C07K1/20;C07K1/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種阿達木單抗的陽離子交換色譜純化方法，包括對CHO細胞發酵表達的阿達木單抗發酵液進行陽離子交換色譜洗脫、疏水作用色譜洗脫，其特征在于，包括以下步驟：

1)將CHO細胞發酵表達后菌液分離；

2)將發酵液用水稀釋，調節pH至6.00±0.10；

3)過陽離子交換柱，用pH 5.5-6.5、含有0.1-0.5mol/L尿素的緩沖液進行第一次洗脫，然后用pH 5.5-6.5、含有質量分數0.1％-1.0％的甜菜堿類表面活性劑的緩沖液進行第二次洗脫，收集洗脫組分；

4)將收集的組分通過疏水作用色譜洗脫，所述的疏水作用色譜洗脫分為2步洗脫，其中，第一步洗脫的洗脫液為pH5.5-6.5、0.15-0.4mol/L(NH₄)₂SO₄的PBS緩沖液，第二步洗脫的洗脫液為pH5.5-6.5的PBS緩沖液，收集洗脫組分。

其中，步驟3)所述的甜菜堿類表面活性劑選自十二烷基二羥乙基甜菜堿、十八烷基二羥乙基甜菜堿或椰油酰胺丙基甜菜堿。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)所述的分離為將發酵液進行4000-8000g離心，然后對上清液進行6000-8000g離心。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述的發酵液用水稀釋是稀釋至電導率7.0±0.20mS/cm，調節pH是用檸檬酸溶液調節至6.00±0.10。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)調節pH前，將發酵液進行過濾，取上清液。

5.根據權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于，步驟3)所述的第一次洗脫的洗脫液為pH 6.0的含0.2mol/L尿素的20mmol/L PBS緩沖液。

6.根據權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于，步驟3)所述的第二次洗脫的洗脫液為20-60mmol/L檸檬酸鹽緩沖液；步驟3)所述的第二次洗脫的洗脫液中含有150-200mmol/L氯化鈉。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟3)所述的第二次洗脫的洗脫液為45mmol/L檸檬酸鹽緩沖液；步驟3)所述的第二次洗脫的洗脫液中含有180mmol/L氯化鈉、1％質量份的甜菜堿類表面活性劑和2％體積份的乙醇。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述的檸檬酸鹽緩沖液為檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述的檸檬酸鹽緩沖液為檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液。