[發明專利]表達重組蛋白G的細菌磁顆粒及其應用

有效

• 申請號: 201610154335.8
• 申請日: 2016-03-17
• 公開（公告）號: CN105572396B
• 公開（公告）日: 2017-12-08
• 發明（設計）人: 張金菊;王紅光
• 申請（專利權）人: 北京中科圓融生物科技發展有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;G01N33/80;G01N33/68;G01N33/554;C12N15/74
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙)11419
• 代理人: 王玉松,懷春穎

1.一種表達重組蛋白G的細菌磁顆粒的制備方法，所述重組蛋白G的序列是：5-ACTT ACAAACTTGT CATTAATGGT AAAACATTGA AAGGCGAAAC AACTACTAAA GCAGTCGACG CAGAAACTGC AGAAAAAGCC TTCAAACAAT ACGCTAACGA CAACGGTGTC GATGGTGTGT GGACTTATGA TGATGCGACT AAGACCTTTA CGGTCACTGA A GGTTCA GGCGGAAGC GGCGGCGGAAGC GGAGGCTCA GGTAGCGGC ACTT ACAAACTTGT CATTAATGGT AAAACATTGA AAGGCGAAAC AACTACTAAA GCAGTCGACG CAGAAACTGC AGAAAAAGCC TTCAAACAAT ACGCTAACGA CAACGGTGTC GATGGTGTGT GGACTTATGA TGATGCGACT AAGACCTTTA CGGTCACTGA A-3，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

a.構建細菌磁顆粒膜蛋白mamC/mamF基因缺失的趨磁細菌MSR-1突變株；

b.構建功能化細菌磁顆粒膜蛋白融合表達質粒；

c.將功能化細菌磁顆粒融合表達質粒通過接合轉入到步驟a制得的趨磁細菌MSR-1突變株，構建趨磁細菌MSR-1重組株；

d.對趨磁細菌MSR-1重組株進行培養；具體包括如下步驟：

d-a.向培養罐中加入第一培養基，加熱滅菌15-20min，加熱溫度為110-120℃，將趨磁細菌MSR-1重組株接種到培養罐中，無氧狀態進行第一次培養，獲得第一培養液；第一次培養的條件為：起始pH值為 5.3-5.5，培養溫度為28-30℃，培養時間為1-2天，搖床轉速為250-280轉/分鐘；

d-b.將第一培養液加入含有第二培養基的培養罐中，進行第二次培養；第二次培養的條件為：起始pH值為6.2-6.3，培養溫度為20-22℃，培養時間為5-8天，搖床轉速為150-180轉/分鐘，培養過程中通入氧氣，通入氧氣的方式為：間隔5min，通入20min氧氣，間隔5min，通入10min空氣，循環5次；所述第一培養基由重量份數為0.2-0.3份甘油酸三乙酯、1.5-3份多聚谷氨酸、0.2-0.3份磷酸吡哆醛、0.5-1份硝酸銨、0.02-0.05份維生素C、10-12份葡萄糖酸鈣、0.2-0.3份十二烷基硫酸鈉、0.5-1份月桂酰肌氨酸、0.5-1份成纖維細胞生長因子和1-2份瓊脂組成；所述第二培養基由重量份數為1-1.5份硬脂酰肌氨酸、0.2-0.5份磷酸二氫鉀、10-12份果聚糖、0.5-1份蛋白胨、0.1-0.3份碳酸鈣、0.5-1份海藻酸鈉、0.5-0.7份硫酸亞鐵、1-2份脯氨酸和0.2-0.5份硫酸鎂組成；

e.分離純化，制得功能化細菌磁顆粒。