[發明專利]誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化的方法及其應用

有效

• 申請號: 201610154214.3
• 申請日: 2016-03-16
• 公開（公告）號: CN107201338B
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 裴雪濤;陳琳;謝小燕;房芳;岳文;李艷華;呂洋;黃安平;張博文;劉大慶;何麗娟
• 申請（專利權）人: 華南生物醫藥研究院;中國人民解放軍軍事醫學科學院野戰輸血研究所
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789;C12N5/078
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

本發明公開了誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化的方法及其應用，其中，誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化的方法包括：利用第一培養基對造血干細胞進行第一培養，得到擴增后的造血干細胞，其中，第一培養基為添加了第一添加劑的Stemspan無血清培養基或SCGM無血清培養基，且第一添加劑為選自重組人干細胞因子、重組人促紅素、白介素?3、白介素?6和FMS樣酪氨酸激酶3的至少一種；以及利用第二培養基對上述擴增后的造血干細胞進行第二培養，得到紅系祖細胞，其中，第二培養基為添加了第二添加劑的SCGM無血清培養基，且第二添加劑為選自重組人干細胞因子、胰島素樣生長因子1、重組人促紅素、轉鉄蛋白、地塞米松、谷胺酰胺和類脂的至少一種。

技術領域

本發明涉及生物工程領域，具體地，涉及誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化方法及其應用，更具體地，涉及誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化的方法、用于誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化的試劑盒和用于誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化的系統。

背景技術

近年來由于血液來源緊張以及輸血相關疾病的發生使人們期望尋找更為安全、充足的血液來源。研究表明干細胞在體外能夠誘導紅系分化為紅細胞可作為新的血液來源。除了成熟紅細胞外，紅系祖細胞也可以替代臨床紅細胞輸注，發揮其造血支持治療作用，而且紅系祖細胞能夠在體內繼續增殖，對于很多需要反復輸血治療的患者，有望減少輸血次數以及輸血產生的副作用，從而，紅系祖細胞為臨床血液供應提供新的替代途徑。

然而，目前的紅系祖細胞擴增和誘導體系，還存在增殖和誘導紅系分化效率低等問題，仍需改進。

發明內容

本發明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明的一個目的在于提出一種誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化的方法，該方法的擴增和誘導紅系分化效率高。

因而，根據本發明的一個方面，本發明提供了一種誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化的方法。根據本發明的實施例，該方法包括：利用第一培養基對造血干細胞進行第一培養，以便得到擴增后的造血干細胞，其中，所述第一培養基為添加了第一添加劑的Stemspan無血清培養基或SCGM無血清培養基，且所述第一添加劑為選自重組人干細胞因子、重組人促紅素、白介素-3、白介素-6和FMS樣酪氨酸激酶3的至少一種；以及利用第二培養基對所述擴增后的造血干細胞進行第二培養，以便得到紅系祖細胞，其中，所述第二培養基為添加了第二添加劑的SCGM無血清培養基，且所述第二添加劑為選自重組人干細胞因子、胰島素樣生長因子1、重組人促紅素、轉鉄蛋白、地塞米松、谷胺酰胺和類脂的至少一種。

發明人驚奇的發現，利用本發明的方法，采用無血清培養體系，先利用含有擴增因子的第一添加劑進行第一培養培養，促進造血干細胞的增殖，再利用含有誘導因子的第二添加劑進行第二培養，促進造血干細胞的誘導紅系分化，相對于用單一的誘導培養基進行誘導紅系分化培養，細胞的擴增倍數顯著提高，并且誘導紅系分化的效果更好。此外，相對于Stemspan無血清培養基，SCGM無血清培養基價格低，進而，利用本發明的方法誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化，成本顯著降低。

另外，根據本發明上述實施例的誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化的方法，還可以具有如下附加的技術特征：

根據本發明的實施例，所述第一培養基為添加了第一添加劑的Stemspan無血清培養基。

根據本發明的實施例，在所述第一培養基中，所述重組人干細胞因子的濃度為40-60ng/ml，優選地，為50ng/ml；所述重組人促紅素的濃度為5-15ng/ml，優選地，為10ng/ml；所述白介素-3的濃度為15-25ng/ml，優選地，為20ng/ml；所述白介素-6的濃度為5-15ng/ml，優選地，為10ng/ml；所述FMS樣酪氨酸激酶3的濃度為40-60ng/ml，優選地，為50ng/ml。