[發明專利]誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化的方法及其應用

有效

• 申請號: 201610154214.3
• 申請日: 2016-03-16
• 公開（公告）號: CN107201338B
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 裴雪濤;陳琳;謝小燕;房芳;岳文;李艷華;呂洋;黃安平;張博文;劉大慶;何麗娟
• 申請（專利權）人: 華南生物醫藥研究院;中國人民解放軍軍事醫學科學院野戰輸血研究所
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789;C12N5/078
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.一種誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化的方法，其特征在于，包括：

利用第一培養基對單個核細胞進行第一培養，以便得到擴增后的造血干細胞，其中，所述第一培養基為添加了第一添加劑的Stemspan無血清培養基或SCGM無血清培養基，且所述第一添加劑包括重組人干細胞因子、重組人促紅素、白介素-3、白介素-6和FMS樣酪氨酸激酶3；以及

利用第二培養基對所述擴增后的造血干細胞進行第二培養，以便得到紅系祖細胞，其中，所述第二培養基為添加了第二添加劑的SCGM無血清培養基，且所述第二添加劑包括重組人干細胞因子、胰島素樣生長因子1、重組人促紅素、轉鉄蛋白、地塞米松、谷胺酰胺和類脂。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一培養基為添加了所述第一添加劑的所述Stemspan培養基。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在所述第一培養基中，

所述重組人干細胞因子的濃度為40-60ng/ml；

所述重組人促紅素的濃度為5-15ng/ml；

所述白介素-3的濃度為15-25ng/ml；

所述白介素-6的濃度為5-15ng/ml；

所述FMS樣酪氨酸激酶3的濃度為40-60ng/ml。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在所述第二培養基中，

所述重組人干細胞因子的濃度為80-120ng/ml；

所述胰島素樣生長因子1的濃度為30-50ng/μl；

所述重組人促紅素的濃度為3-7U/ml；

所述轉鉄蛋白的濃度為80-120μg/ml；

所述地塞米松的濃度為0.8-1.2μM；

所述谷胺酰胺的濃度為1.5-2.5mM；

所述類脂的濃度為1.5-2.5mM。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一培養的時間為5-10天。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二培養的時間為10-21天。

7.一種用于誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化的試劑盒，其特征在于，包括：

第一培養基，所述第一培養基用于對造血干祖細胞進行第一培養，以便得到擴增后的造血干細胞；以及

第二培養基，所述第二培養基用于對所述擴增后的造血干細胞進行第二培養，以便得到紅系祖細胞，

其中，所述第一培養基和所述第二培養基是如權利要求1-6中任一項所述的誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化的方法定義的。

8.一種用于誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化的系統，其特征在于，包括：

第一培養裝置，所述第一培養裝置用于利用第一培養基對造血干細胞進行第一培養，以便得到擴增后的造血干細胞；以及

第二培養裝置，所述第二培養裝置與所述第一培養裝置相連，所述第二培養裝置用于利用第二培養基對所述擴增后的造血干細胞進行第二培養，以便得到紅系祖細胞，

其中，所述第一培養基和所述第二培養基是如權利要求1-6中任一項所述的誘導造血干祖細胞增殖和紅系分化的方法定義的。