[發(fā)明專利]基于UPC2?ELSD測(cè)定蜂蜜中4種主要單糖和雙糖含量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610153337.5
• 申請(qǐng)日: 2016-03-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105628825B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-12-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林春花;嚴(yán)楠;許招會(huì);鐘前;廖維林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江西師范大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/74
• 代理公司: 長(zhǎng)沙市融智專利事務(wù)所43114
• 代理人: 魏娟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基于UPC²-ELSD同時(shí)測(cè)定蜂蜜中4種主要單糖和雙糖含量的方法，特別涉及利用UPC²-ELSD同時(shí)測(cè)定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖和麥芽糖含量的方法，屬于食品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

蜂蜜，是一種糖的過(guò)飽和物質(zhì)，其主要成分是果糖、葡萄糖等2種單糖，次要成分是少量的蔗糖、麥芽糖等2種雙糖。GB/T 14963-2011《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)蜂蜜》中要求果糖和葡萄糖該兩種單糖總含量＞60％，蔗糖含量一般＜5％(除“樹(shù)蜂蜜、柑橘蜜、紫苜蓿蜂蜜、荔枝蜂蜜、野桂花蜜”之外的蔗糖含量允許小于10％)。我國(guó)是世界第一養(yǎng)蜂大國(guó)，蜂群數(shù)量和主要蜂產(chǎn)品出口均居世界第一，蜂蜜年產(chǎn)量超30萬(wàn)噸，為國(guó)民經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民的健康做出了積極貢獻(xiàn)。因此，建立一種簡(jiǎn)便、快速、高效地測(cè)定蜂蜜中的含量最高的4種單、雙糖——果糖、葡萄糖、蔗糖和麥芽糖的方法，將有助于蜂蜜產(chǎn)品質(zhì)量達(dá)到上述標(biāo)準(zhǔn)，從而降低蜂蜜摻假的隱患，為實(shí)現(xiàn)蜂蜜大國(guó)轉(zhuǎn)變成蜂蜜強(qiáng)國(guó)提供有力的技術(shù)支撐。

現(xiàn)有國(guó)標(biāo)GB/T 18932.22-2003《蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測(cè)定方法》中采用液相色譜-示差折光檢測(cè)法測(cè)定蜂蜜中該4種糖的含量，該方法雖具有較好的分離度和準(zhǔn)確性，但示差檢測(cè)器對(duì)溫度變化極其敏感使得基線穩(wěn)定時(shí)間較長(zhǎng)，也不適合梯度洗脫，且檢測(cè)靈敏度較低。

目前有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，可以采用HPLC結(jié)合C-CAD或ELSD，進(jìn)行等度洗脫來(lái)檢測(cè)食物中糖類化合物的方法，如果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖和麥芽三糖等。但是采用HPLC結(jié)合C-CAD進(jìn)行等度洗脫存在實(shí)質(zhì)性的缺陷，如時(shí)間長(zhǎng)，效率低，HPLC使用的糖柱或氨基柱易發(fā)生化學(xué)降解而導(dǎo)致測(cè)試結(jié)果穩(wěn)定性相對(duì)較差，從而導(dǎo)致儀器損耗大，成本高，不利于推廣應(yīng)用。UPC² (Ultra-performance convergence chromatography,超高效合相色譜)是Waters公司新推出的基于超臨界流體色譜的技術(shù)體系，其流動(dòng)相以超臨界CO₂為主要組成，具有粘度低、分子擴(kuò)散快、分離效率高、綠色環(huán)保的優(yōu)勢(shì)。中國(guó)專利(公開(kāi)號(hào)為CN 105301131A)成功將UPC²–ELSD用于測(cè)定分子蒸餾單硬脂酸甘油酯中單甘酯，具有簡(jiǎn)便、快速、高效的特點(diǎn)。但是目前并沒(méi)有將UPC²–ELSD用于檢測(cè)蜂蜜中糖類化合物的任何相關(guān)報(bào)道，而糖類化合物與酯類化合物存在的最大區(qū)別點(diǎn)在于，糖類化合物比酯類化合物具有更強(qiáng)的極性，特別是糖類中的單糖或低聚糖類等存在大量的同分異構(gòu)體，如單糖中的果糖和葡萄糖，是互為同分異構(gòu)體，二糖中的蔗糖和麥芽糖，也是互為同分異構(gòu)體，因此糖類化合物比酯類化合物更難實(shí)現(xiàn)分離。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有的關(guān)于蜂蜜中糖類化合物的檢測(cè)技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明的目的是在于提供一種簡(jiǎn)便高效、穩(wěn)定性好、快速精確測(cè)定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖和麥芽糖方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明提供了一種基于UPC²-ELSD同時(shí)測(cè)定蜂蜜中4種主要單糖和雙糖含量的方法，該方法是將蜂蜜樣品溶液依次經(jīng)過(guò)UPC²分離和ELSD檢測(cè)，采用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析，得出蜂蜜樣品中果糖、葡萄糖、蔗糖和麥芽糖各自的含量。

優(yōu)選的方案，包括以下步驟：(1)將果糖、葡萄糖、蔗糖和麥芽糖的混合標(biāo)準(zhǔn)液依次經(jīng)過(guò)UPC²分離和ELSD檢測(cè)，依據(jù)檢測(cè)結(jié)果建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)將蜂蜜樣品溶液依次經(jīng)過(guò)UPC²分離和ELSD檢測(cè)，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行定量分析，得出蜂蜜樣品中果糖、葡萄糖、蔗糖和麥芽糖各自的含量。

較優(yōu)選的方案，檢測(cè)混合標(biāo)準(zhǔn)液及蜂蜜樣品溶液過(guò)程中，UPC²控制的條件參數(shù)如下：

色譜柱：ACQUITY UPC²BEH色譜柱，100mm×3.0mm，亞乙基橋化顆粒， 1.7μm；

柱溫：50℃；

樣品室溫度：10℃；

流動(dòng)相A：超臨界CO₂；

流動(dòng)相B：甲醇溶液，含體積百分?jǐn)?shù)0.2％的NH₃·H₂O；

洗脫梯度：

背壓：1700psi；

流速：1.0mL/min；

進(jìn)樣體積：1μL；