[發明專利]一株解淀粉芽孢桿菌及其應用

在審

• 申請號: 201610151751.2
• 申請日: 2016-03-16
• 公開（公告）號: CN105754895A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 李崎;朱林江;范子豪;李永仙;劉春鳳;鄭飛云;王金晶;王佳琪
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23L11/00;A01N63/00;A01P1/00;C12R1/07
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 耿曉岳

技術領域

本發明涉及一株解淀粉芽孢桿菌及其應用，屬于發酵技術領域。

背景技術

芽孢桿菌的菌體呈桿狀，形態為長直或接近直，大小為0.3～2.2×1.2～7.0微米。多數運動，鞭毛典型側生。菌體可形成耐熱內生孢子，在一個孢子囊細胞中，孢子不多于1個。菌體暴露在空氣中并不妨礙孢子的形成，革蘭氏反應陽性，僅在生長早起可能出現陰性。有機化能營養，可利用多種底物進行嚴格呼吸代謝，嚴格發酵代謝或者呼吸和發酵二者兼有的代謝。在呼吸代謝中，最終的電子受體是分子氧，在一些種中可以用硝酸鹽代替氧，大多數的種可以產生氫氧化物酶。嚴格好氧或兼性厭氧。

解淀粉芽孢桿菌是芽孢桿菌屬中的一個種，嚴格好氧，革蘭氏陽性菌，細胞可運動，大小為0.7～0.9×1.8～3.0微米。菌體經常呈鏈狀排列，可以形成橢圓的芽孢，芽孢中生。最適生長溫度為30～40℃，VP反應陽性，可以降解酪蛋白、明膠、淀粉、吐溫20、40以及60，能耐受5％以上的鹽濃度。此種是α淀粉酶以及一些常用蛋白酶的重要來源。

蠶豆醬是以蠶豆等為原料發酵釀制而成的保持蠶豆醬原形的半流動粘稠體或半固態調味品。蠶豆醬在我國有著悠久的歷史，營養豐富，味道鮮美，有助消化，增進食欲，因此深受廣大消費者的歡迎。

發明內容

本發明提供了一株解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)。

所述解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)，已于2016年1月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.12091，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所。

本發明所述的解淀粉芽孢桿菌分離自安徽某知名醬品傳統方法釀制的醬醅，該菌株具有典型特征的M13-PCR指紋，即菌株專一性的特征指紋，如圖1所示；測序分析，其16srDNA序列基因型如SEQIDNO.1所示，NCBI登錄號為KT961124。

所述解淀粉芽孢桿菌對蠟狀芽孢桿菌以及部分乳酸菌具有較明顯的抑制作用。其基因組內存在編碼表面活性肽Surfactin的基因。

所述解淀粉芽孢桿菌為從風味口感較佳的傳統方法釀制的豆瓣醬醬醅中篩選得到的，其保藏條件如下：從生長良好的LB培養基平板中取單菌落移入新鮮的液體LB培養基中，37℃搖床培養24h，取1.3mL菌液移入盛有0.5mL無菌甘油(40％，v/v)的甘油管中，放-80℃冰箱保存。

所述LB培養基為：蛋白胨1％；酵母粉0.5％；NaCl1％；pH自然。

所述解淀粉芽孢桿菌的培養條件為：將甘油管保藏的解淀粉芽孢桿菌接入LB液體培養基，在37℃、180rpm搖瓶培養24h即可到達對數期中后期。

本發明還提供了一種所述解淀粉芽孢桿菌的應用，用于抑制發酵過程中醬醅中蠟狀芽孢桿菌等潛在病原菌的生長。

本發明提供的解淀粉芽孢桿菌是蠶豆醬發酵過程中的無害菌，對醬醅中有害微生物的抑制有一定的作用，可用于抑制豆瓣醬生產過程中的有害菌。

生物材料保藏

解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)，已于2016年1月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.12091，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所。

附圖說明

圖1Rep-PCR(M13-PCR)擴增指紋圖譜，M：DL10000marker，2.8：樣品。

具體實施方式

實施例1解淀粉芽孢桿菌的篩選

從傳統發酵豆瓣醬88天左右的醬醅中取1g樣品加入到9mL無菌水中，輕微振蕩制成懸濁液，將懸濁液梯度稀釋，涂布于LB平板，37℃好氧培養24至48h。挑取白色扁平有褶皺的單菌落反復進行平板劃線分離，重復三次得到純化的單菌落，供下一步鑒定用。

鑒定主要通過：1)菌落特征觀察：用肉眼直接觀察，挑選菌落直徑在2～4mm之間，圓形或不規則，表面粗糙有褶皺，白色不透明等符合解淀粉芽孢桿菌菌落特征的菌株。2)個體形態觀察：用光學顯微鏡革蘭氏染色觀察。挑選桿狀、革蘭氏陽性的菌株。將滿足鑒定條件的菌株挑出甘油管保藏。