[發明專利]核酸提取用磁性微珠的制備方法

有效

• 申請號: 201610151087.1
• 申請日: 2016-03-17
• 公開（公告）號: CN105642239B
• 公開（公告）日: 2019-05-07
• 發明（設計）人: 黃波;李鵬;謝洋;楊帆;付東;隋新;張曉臣
• 申請（專利權）人: 黑龍江省科學院高技術研究院
• 主分類號: B01J20/22
• 分類號: B01J20/22;B01J20/28;B01J20/30;C12N15/10
• 代理公司: 哈爾濱市文洋專利代理事務所(普通合伙) 23210
• 代理人: 王艷萍

1.核酸提取用磁性微珠的制備方法，其特征在于該方法按以下步驟進行：

一、向30mL、0.5mol/L檸檬酸溶液中加入5g納米Fe₃O₄，調節溶液的pH值至5.5，在氮氣保護下攪拌，然后將納米Fe₃O₄取出，用丙酮洗滌，再將納米Fe₃O₄放入去離子水中超聲波分散，之后加入無水乙醇，形成乙醇-水體體系，并調節溶液的pH值至6，然后向含有納米Fe₃O₄的乙醇-水體溶液滴加正硅酸乙酯，納米Fe₃O₄與正硅酸乙酯的質量比為1:1，升溫至60～80℃，攪拌反應8h，最后將納米Fe₃O₄依次用去離子水和無水乙醇沖洗，干燥箱干燥，得到Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠；納米Fe₃O₄的粒徑為13nm；

二、將步驟一制備的Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠加入乙醇-水溶液中，再分別加入質量濃度為28％的濃氨水和TEOS，于室溫振蕩反應3h，然后取出磁性微珠用去離子水洗滌至中性，再依次用無水乙醇和丙酮洗滌，之后于60℃真空干燥，再將磁性微珠放入質量濃度為35％的稀鹽酸溶液中浸泡，然后重新用去離子水洗滌至中性，再依次用無水乙醇和丙酮洗滌；

三、將步驟二洗滌后的磁性微珠分散于無水甲苯中，在氮氣保護下加入環氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷試劑，回流反應，得到改性磁珠，將所得改性磁珠依次用甲苯、甲醇、甲醇水溶液和甲醇洗滌并抽干，烘干后得到表面鍵合環氧基的磁性微珠；

四、將烘干得到表面鍵合環氧基的磁性微珠分散于pH值為3的質量濃度為35％的稀鹽酸溶液中，在100℃下加熱回流2h，產物以去離子水洗滌至中性后，再分別以無水乙醇和丙酮洗滌，過濾收集磁性微珠，烘干得到表面鍵合二醇基的磁性微珠；

其中步驟二所述乙醇-水溶液中無水乙醇和水的體積比為5:1；步驟三中甲醇水溶液的體積濃度為50％；步驟四中表面鍵合環氧基的磁性微珠的質量與稀鹽酸溶液的體積比為1g:10mL。

2.根據權利要求1所述的核酸提取用磁性微珠的制備方法，其特征在于步驟二中Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠的質量與乙醇-水溶液的體積比為1g:(38～39)mL，Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠的質量與氨水的體積比為5g:(3～5)mL，Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠質量與TEOS的體積比為5g:(1～2)mL。

3.根據權利要求1所述的核酸提取用磁性微珠的制備方法，其特征在于步驟三中磁性微珠的質量與無水甲苯的體積比為1g:(5～6)mL，磁性微珠的質量與環氧丙基丙氧基硅烷的體積比為5g:(1～2)mL。

4.根據權利要求1所述的核酸提取用磁性微珠的制備方法，其特征在于步驟三中回流反應的條件為在110℃下回流反應8h。