[發(fā)明專利]核酸提取用磁性微珠的制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610151087.1 | 申請日： | 2016-03-17 |
| 公開（公告）號： | CN105642239B | 公開（公告）日： | 2019-05-07 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 黃波;李鵬;謝洋;楊帆;付東;隋新;張曉臣 | 申請（專利權(quán)）人： | 黑龍江省科學院高技術(shù)研究院 |
| 主分類號： | B01J20/22 | 分類號： | B01J20/22;B01J20/28;B01J20/30;C12N15/10 |
| 代理公司： | 哈爾濱市文洋專利代理事務(wù)所(普通合伙) 23210 | 代理人： | 王艷萍 |
| 地址： | 150080 黑龍江省哈爾濱市*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 核酸 提取 磁性 制備 方法 | ||
1.核酸提取用磁性微珠的制備方法，其特征在于該方法按以下步驟進行：
一、向30mL、0.5mol/L檸檬酸溶液中加入5g納米Fe3O4，調(diào)節(jié)溶液的pH值至5.5，在氮氣保護下攪拌，然后將納米Fe3O4取出，用丙酮洗滌，再將納米Fe3O4放入去離子水中超聲波分散，之后加入無水乙醇，形成乙醇-水體體系，并調(diào)節(jié)溶液的pH值至6，然后向含有納米Fe3O4的乙醇-水體溶液滴加正硅酸乙酯，納米Fe3O4與正硅酸乙酯的質(zhì)量比為1:1，升溫至60～80℃，攪拌反應(yīng)8h，最后將納米Fe3O4依次用去離子水和無水乙醇沖洗，干燥箱干燥，得到Fe3O4/SiO2磁性微珠；納米Fe3O4的粒徑為13nm；
二、將步驟一制備的Fe3O4/SiO2磁性微珠加入乙醇-水溶液中，再分別加入質(zhì)量濃度為28％的濃氨水和TEOS，于室溫振蕩反應(yīng)3h，然后取出磁性微珠用去離子水洗滌至中性，再依次用無水乙醇和丙酮洗滌，之后于60℃真空干燥，再將磁性微珠放入質(zhì)量濃度為35％的稀鹽酸溶液中浸泡，然后重新用去離子水洗滌至中性，再依次用無水乙醇和丙酮洗滌；
三、將步驟二洗滌后的磁性微珠分散于無水甲苯中，在氮氣保護下加入環(huán)氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷試劑，回流反應(yīng)，得到改性磁珠，將所得改性磁珠依次用甲苯、甲醇、甲醇水溶液和甲醇洗滌并抽干，烘干后得到表面鍵合環(huán)氧基的磁性微珠；
四、將烘干得到表面鍵合環(huán)氧基的磁性微珠分散于pH值為3的質(zhì)量濃度為35％的稀鹽酸溶液中，在100℃下加熱回流2h，產(chǎn)物以去離子水洗滌至中性后，再分別以無水乙醇和丙酮洗滌，過濾收集磁性微珠，烘干得到表面鍵合二醇基的磁性微珠；
其中步驟二所述乙醇-水溶液中無水乙醇和水的體積比為5:1；步驟三中甲醇水溶液的體積濃度為50％；步驟四中表面鍵合環(huán)氧基的磁性微珠的質(zhì)量與稀鹽酸溶液的體積比為1g:10mL。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸提取用磁性微珠的制備方法，其特征在于步驟二中Fe3O4/SiO2磁性微珠的質(zhì)量與乙醇-水溶液的體積比為1g:(38～39)mL，F(xiàn)e3O4/SiO2磁性微珠的質(zhì)量與氨水的體積比為5g:(3～5)mL，F(xiàn)e3O4/SiO2磁性微珠質(zhì)量與TEOS的體積比為5g:(1～2)mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸提取用磁性微珠的制備方法，其特征在于步驟三中磁性微珠的質(zhì)量與無水甲苯的體積比為1g:(5～6)mL，磁性微珠的質(zhì)量與環(huán)氧丙基丙氧基硅烷的體積比為5g:(1～2)mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸提取用磁性微珠的制備方法，其特征在于步驟三中回流反應(yīng)的條件為在110℃下回流反應(yīng)8h。
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