[發(fā)明專利]核酸提取用磁性微珠的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610151087.1
• 申請日: 2016-03-17
• 公開（公告）號: CN105642239B
• 公開（公告）日: 2019-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃波;李鵬;謝洋;楊帆;付東;隋新;張曉臣
• 申請（專利權(quán)）人: 黑龍江省科學(xué)院高技術(shù)研究院
• 主分類號: B01J20/22
• 分類號: B01J20/22;B01J20/28;B01J20/30;C12N15/10
• 代理公司: 哈爾濱市文洋專利代理事務(wù)所(普通合伙) 23210
• 代理人: 王艷萍

核酸提取用磁性微珠的制備方法，涉及磁性微珠的制備方法。本發(fā)明是要解決現(xiàn)有生物磁珠粒徑大，表面能小，核酸吸附效率低的問題。方法1：一、制備Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠；二、磁性微珠洗滌；三、制備表面鍵合環(huán)氧基的磁性微珠；四、制備表面鍵合二醇基的磁性微珠。方法2：一、制備Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠；二、磁性微珠洗滌；三、制備表面鍵合環(huán)氧基的磁性微珠；四、制備表面包覆亞氨基二乙酸的磁性微珠。本發(fā)明方法制備的磁珠粒徑小，為納米級；提高了磁珠的表面能，延長磁珠在提取液中的懸浮時間，能夠與目標(biāo)提取物更有效地接觸，提高目標(biāo)提取物的提取率。本發(fā)明用于制備核酸提取用磁性微珠。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及磁性微珠的制備方法。

背景技術(shù)

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷廣泛應(yīng)用，分子生物學(xué)技術(shù)已從以往的小規(guī)模的實驗室研究逐漸轉(zhuǎn)變成諸如疾病診斷、基因組測序、疾病基因的流行病學(xué)調(diào)研等需要大規(guī)模的程序化的操作的實用手段。以人類基因組測序為例，需要年復(fù)一年的核酸提取、純化、測序。許多優(yōu)秀的高級科研人員的大量的時間被花費在簡單的重復(fù)勞動之中，實在是一種巨大的浪費。同時手工操作的不可避免的不規(guī)范性容易造成誤差，人類基因組測序一般要重復(fù)3次以上，又進一步加重工作強度。

磁性高分子微珠簡稱磁性微珠，是由磁性材料與高分子材料通過化學(xué)或物理方法復(fù)合而成的一種具有眾多優(yōu)異性能的功能材料。磁性材料主要有鐵酸鹽、鐵磁礦、純鐵粉、Fe₃O₄等，高分子材料有天然高分子材料及合成高分子材料兩種，天然高分子材料有淀粉、明膠、纖維素、殼聚糖等，合成高分子材料有聚苯乙烯、聚苯乙烯醇、消化纖維等。磁性微珠可以通過磁珠表面改性或者功能團嫁接等方式將功能團(-OH、-COOH、NH₂等)引入磁性微珠表面，進而得到具有功能化的磁性微珠。

磁性高分子微珠作為近年發(fā)展起來的一種新型磁性材料，不但具有納米效應(yīng)，即表面效應(yīng)、小尺寸效應(yīng)、宏觀量子隧道效應(yīng)和體積效應(yīng)，還具有磁學(xué)性質(zhì)，如超順磁性與高磁化率等特性。其應(yīng)用已經(jīng)從傳統(tǒng)的技術(shù)領(lǐng)域發(fā)展到高新技術(shù)領(lǐng)域，從單純的磁學(xué)范圍擴展到與磁學(xué)相關(guān)的交叉學(xué)科領(lǐng)域。以核酸分離領(lǐng)域應(yīng)用最為廣泛。

傳統(tǒng)的核酸分離需要乙醇沉淀、氯仿萃取、離心分離、層膜析出、清晰、富集等操作，其步驟繁瑣、耗時費力，而分離效果及效率并不理想。磁性微珠在核酸分離中的應(yīng)用，加快了核酸富集分離的自動化程度，提高了分離效果和效率，大大降低了其他物質(zhì)對核酸的分離干擾，對推進核酸快速富集分離提取技術(shù)的發(fā)展起到了積極的作用。

目前磁珠純化技術(shù)正在朝著全自動操作，提取和分離樣本多樣化、系統(tǒng)化方向發(fā)展。國產(chǎn)化磁珠的研制成功必將大幅度提高生物學(xué)科研工作效率、推動生物學(xué)科研究和產(chǎn)業(yè)化快速發(fā)展。但現(xiàn)有提取核酸用的生物磁珠粒徑大，存在表面能小、核酸吸附效率低的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是要解決現(xiàn)有生物磁珠粒徑大，表面能小，核酸吸附效率低的問題，提供核酸提取用磁性微珠的制備方法。

本發(fā)明核酸提取用磁性微珠的制備方法，按以下步驟進行：