[發明專利]一種具厚幾丁質外殼微小節肢動物無損傷憑證標本的基因組DNA提取方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201610147895.0
• 申請日: 2016-03-15
• 公開（公告）號: CN105734050A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發明（設計）人: 岳巧云;單振菊;邱德義;陳健;吳可量;劉德星;魏曉雅
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國中山出入境檢驗檢疫局
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

1.一種具厚幾丁質外殼微小節肢動物無損傷憑證標本的基因組DNA提取方法，其特征在于，將具厚幾丁質外殼微小節肢動物用幾丁質酶處理后，然后加入裂解液中裂解后，獲得基因組DNA。

2.根據權利要求1所述的具厚幾丁質外殼微小節肢動物無損傷憑證標本的基因組DNA提取方法，其特征在于，所述的裂解液為：100～900mMGuSCN、30mMEDTAPH8.0、30mMTris-HClPH8.0、質量分數0.5％TritonX-100、質量分數5％Tween-20，溶劑為水。

3.根據權利要求1所述的具厚幾丁質外殼微小節肢動物無損傷憑證標本的基因組DNA提取方法，其特征在于，是將具厚幾丁質外殼微小節肢動物放置于含1mg/ml幾丁質酶的pH6.0磷酸緩沖液中，25℃消化24小時，然后將消化后的具厚幾丁質外殼微小節肢動物放置于裂解液中，56℃裂解24h，獲得基因組DNA，所述的裂解液為：700mMGuSCN、30mMEDTAPH8.0、30mMTris-HClPH8.0、質量分數0.5％TritonX-100、質量分數5％Tween-20，溶劑為水。

4.一種具厚幾丁質外殼微小節肢動物無損傷憑證標本的基因組DNA提取試劑盒，包括DNA提取試劑，其特征在于，還包含幾丁質酶工作液和裂解液。

5.根據權利要求4所述的具厚幾丁質外殼微小節肢動物無損傷憑證標本的基因組DNA提取試劑盒，其特征在于，所述的裂解液為：100～900mMGuSCN、30mMEDTAPH8.0、30mMTris-HClPH8.0、質量分數0.5％TritonX-100、質量分數5％Tween-20，溶劑為水。

6.根據權利要求4所述的具厚幾丁質外殼微小節肢動物無損傷憑證標本的基因組DNA提取試劑盒，其特征在于，所述的幾丁質酶工作液是含1mg/ml幾丁質酶的pH6.0磷酸緩沖液，所述的裂解液為：700mMGuSCN、30mMEDTAPH8.0、30mMTris-HClPH8.0、質量分數0.5％TritonX-100、質量分數5％Tween-20，溶劑為水。

7.根據權利要求4所述的具厚幾丁質外殼微小節肢動物無損傷憑證標本的基因組DNA提取試劑盒，其特征在于，所述的DNA提取試劑盒中還包括洗液A，洗液B、正向引物LCO14905’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’、反向引物HCO21985’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’、dNTP、含Mg²⁺的10×Buffer和Taq酶。