[發(fā)明專利]一種采用超高壓提取、生物酶解、逆流色譜純化野生榛蘑紫杉醇的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610147782.0
• 申請日: 2016-03-09
• 公開（公告）號: CN105669604B
• 公開（公告）日: 2018-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張亞紅;張永富
• 申請（專利權(quán)）人: 大興安嶺富林山野珍品科技開發(fā)有限責(zé)任公司
• 主分類號: C07D305/14
• 分類號: C07D305/14
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨

本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種從大興安嶺野生榛蘑里提取純化紫杉醇的方法，特別是涉及一種利用超高壓提取、生物酶解、逆流色譜純化野生榛蘑紫杉醇的新方法。本發(fā)明優(yōu)點：1、超高壓提取在常溫進(jìn)行，營養(yǎng)成分破壞少，提取迅速。2、生物酶解溫度低，且采用等離子液體做為溶劑，紫杉醇有效成分含量大為提高，高達(dá)99.7％。3、采用高速逆流色譜技術(shù)純化，克服了常規(guī)技術(shù)獲得紫杉醇時間較長、得率較低的缺點。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種從大興安嶺野生榛蘑里提取純化紫杉醇的方法，特別是涉及一種利用超高壓提取、生物酶解、逆流色譜純化野生榛蘑紫杉醇的新方法。

背景技術(shù)：

國內(nèi)均從紅豆杉科植物短葉紅豆杉和中間紅豆杉的針葉和樹皮及云南紅豆杉等植物中提取紫杉醇，原料資源單一，價格昂貴，

國內(nèi)提取紫杉醇工藝主要是采用甲醇、丙酮、乙酸乙酯等作為提取溶劑，采用液液萃取、固液萃取法，提取時間16-48小時，近年也有采用超聲波、微波提取技術(shù)的，用柱色譜純化，其純化效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如運用超高壓提取、生物酶解、色譜純化野生榛蘑紫杉醇的效果。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明方法采用超高壓提取技術(shù)、生物酶解、高速逆流色譜技術(shù)，紫杉醇有效成分含量較高，高達(dá)99.7％。本發(fā)明優(yōu)點：超高壓提取在常溫進(jìn)行，營養(yǎng)成分破壞少；生物酶解溫度低，且采用離子液體做為溶劑，紫杉醇有效成分提取率大大加強；同時采用高速逆流色譜技術(shù)純化，克服了常規(guī)技術(shù)獲得紫杉醇時間較長、得率較低的缺點。

本發(fā)明的目的在于克服常規(guī)技術(shù)提取時間較長、產(chǎn)品純度低等缺點，提供一種利用超高壓提取、生物酶解、逆流色譜純化野生榛蘑紫杉醇的新方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種采用超高壓提取、生物酶解、逆流色譜純化野生榛蘑紫杉醇的新方法，其步驟如下：

(1)超高壓提取：干燥野生榛蘑粉碎至20-40目，加入適量倍數(shù)的提取溶劑，將混合物放入耐壓袋，在一定超高壓力下處理3-5分鐘，回收溶劑；

(2)生物酶解：稱重提取液，加入提取液質(zhì)量5-8倍數(shù)的離子液體及適量復(fù)合酶，在45-50℃下酶解2-4h；

(3)收集：回收液體，薄層層析檢測分析，收集紫杉醇部分；

(4)粗過濾：過濾，合并兩次濾液，得紫杉醇粗提液；

(5)濃縮噴粉：將紫杉醇粗提液濃縮至22°Bé，并噴成粉；

(6)柱層析：將所得粗品粉末，溶于有機(jī)溶劑，加適量柱填料攪拌，烘干過60-80目篩，干法上樣，上工業(yè)級柱進(jìn)行柱層析；

(7)洗脫：以2-4BV/h流速，先用水，再用不同體積濃度溶劑進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤監(jiān)測；

(8)真空冷凍干燥：收集紫杉醇溶液，在適當(dāng)溫度、干燥壓力下冷凍干燥；

(9)分相：稱取一定克數(shù)紫杉醇，選擇適當(dāng)?shù)腍SCCC溶劑系統(tǒng)，按比例將各種溶劑加入分液漏斗中，震蕩使溶液充分混合，放置過夜，分相平衡后分出上相和下相；

(10)HSCCC分離純化：以溶劑系統(tǒng)的上相為固定相，下相為流動相，調(diào)整轉(zhuǎn)速，以一定流速泵入HSCCC螺旋管，分離純化紫杉醇提取物，得到含量為99.5％以上的成品。

具體實施方式：

實施例1：一種采用超高壓提取、生物酶解、逆流色譜純化野生榛蘑紫杉醇的新方法，生產(chǎn)步驟如下：

(1)超高壓提取：5000g干燥野生榛蘑粉碎至20目，加入5倍的乙酸乙酯、二氯甲烷(4∶1)提取溶劑，將混合物放入耐壓袋，在200MPA超高壓力下處理3分鐘，回收溶劑；