[發明專利]一種采用超高壓提取、生物酶解、逆流色譜純化野生榛蘑紫杉醇的方法有效
| 申請號： | 201610147782.0 | 申請日： | 2016-03-09 |
| 公開（公告）號： | CN105669604B | 公開（公告）日： | 2018-12-25 |
| 發明（設計）人： | 張亞紅;張永富 | 申請（專利權）人： | 大興安嶺富林山野珍品科技開發有限責任公司 |
| 主分類號： | C07D305/14 | 分類號： | C07D305/14 |
| 代理公司： | 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139 | 代理人： | 孫皓晨 |
| 地址： | 165000 黑龍江省*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 采用 超高壓 提取 生物酶 逆流 色譜 純化 野生 紫杉醇 新方法 | ||
1.一種采用超高壓提取、生物酶解、逆流色譜純化野生榛蘑紫杉醇的方法，其步驟如下：
(1)超高壓提?。焊稍镆吧荒⒎鬯橹?0-40目，加入適量倍數的提取溶劑，將混合物放入耐壓袋，在一定超高壓力下處理3-5分鐘，回收溶劑，其中，所述的提取溶劑為乙酸乙酯、二氯甲烷，超高壓力為200-400MPA；
(2)生物酶解：稱重提取液，加入提取液質量5-8倍數的離子液體及適量復合酶，在45-50℃下酶解2-4h；其中，所述的復合酶為纖維素酶、果膠酶、葡聚糖酶、木聚糖酶中的兩種或兩種以上，加量為離子液體重量的0.2-0.3‰，離子液體為1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽或1-烷基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽；
(3)收集：回收液體，薄層層析檢測分析，收集紫杉醇部分；
(4)粗過濾：過濾，合并兩次濾液，得紫杉醇粗提液；
(5)濃縮噴粉：將紫杉醇粗提液濃縮至22°Bé，并噴成粉；
(6)柱層析：將所得粗品粉末，溶于有機溶劑，加適量柱填料攪拌，烘干過60-80目篩，干法上樣，上工業級柱進行柱層析；其中，所述的有機溶劑為丙酮、二氯乙烷、乙酸乙酯中的任意一種，柱填料為硅膠、氧化鋁、CIS反相硅膠中的任意兩種或兩種以上；
(7)洗脫：以2-4BV/h流速，先用去離子水，再用50％、60％、70％、80％體積濃度的甲醇溶劑進行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤監測；
(8)干燥：真空冷凍干燥：收集紫杉醇溶液，在適當溫度、干燥壓力下冷凍干燥；
(9)分相：稱取一定克數紫杉醇，選擇適當的HSCCC溶劑系統，按比例將各種溶劑加入分液漏斗中，震蕩使溶液充分混合，放置過夜，分相平衡后分出上相和下相；其中，所述的HSCCC溶劑系統為乙酸乙酯-甲醇-水3:5:2、正丁醇-丙酮-水4:2:5、氯仿-乙醇-水5:4:3中的任意一種；
(10)HSCCC分離純化：以溶劑系統的上相為固定相，下相為流動相，調整轉速為800-1000r/min，以2-3mL/min的流速泵入HSCCC螺旋管，分離純化紫杉醇提取物，得到含量為99.5％以上的成品。
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