[發(fā)明專利]表達傳染性法氏囊病毒VP2基因的重組雞馬立克氏病病毒疫苗株及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610147339.3
• 申請日: 2016-03-15
• 公開（公告）號: CN105695423B
• 公開（公告）日: 2018-04-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王笑梅;李凱;劉長軍;張艷萍;崔紅玉;祁小樂;高立;高玉龍;王永強;高宏雷
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司11139
• 代理人: 孫皓晨,馬鑫

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種重組雞馬立克氏病病毒疫苗株及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，特別涉及一種表達傳染性法氏囊病毒VP2基因的重組雞馬立克氏病病毒疫苗株及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

我國是一個養(yǎng)禽大國。雞傳染性法氏囊病和馬立克氏病是危害我國養(yǎng)禽業(yè)健康發(fā)展的兩種最為重要的免疫抑制性傳染病，其廣泛流行給我國養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。

雞傳染性法氏囊病(IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的一種主要危害3-6周齡雛雞的急性、高度接觸性傳染病。本病于1957年首發(fā)于美國Gumboro地區(qū)，被稱為“甘布羅病”；由Cosgrove于1962年首先報道，由于死于該病的雞的腎臟嚴重腫大，因此也稱為“禽腎病”。60年來，該病一直威脅著養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展?？乖儺?、免疫抑制，特別是超強毒株(vvIBDV)的出現(xiàn)，使得該病的防控形勢更加嚴峻。國際獸醫(yī)局(OIE)認為IBD已經(jīng)成為影響社會經(jīng)濟的重要疾病。IBDV基因組由兩個雙股RNA節(jié)段組成，分別為A節(jié)段和B節(jié)段。A節(jié)段編碼的VP2蛋白構(gòu)成病毒的外衣殼，是IBDV的主要結(jié)構(gòu)蛋白。VP2可以誘導(dǎo)機體產(chǎn)生中和抗體，是IBDV主要的宿主保護性抗原(Heine H G,Boyle,D B.Infectious bursal disease virus structural protein VP2expressed by a fowlpox virus recombinant confers protection against disease in chickens.Arch Virol,1993,131:277-292.)。疫苗免疫是防控vvIBDV的主要手段，但vvIBDV致病性強且不適應(yīng)細胞培養(yǎng)，疫苗株的獲得只能通過將野生vvIBDV在雞胚或CEF細胞上傳代致弱。這種傳統(tǒng)的馴化方法費時費力，且結(jié)果帶有隨機性(Gao L,Qi X,Li K,Gao H,Gao Y,Qin L,Wang Y,Wang X.Development of a tailored vaccine against challenge with very virulent infectious bursal disease virus of chickens using reverse genetics.Vaccine 2011,29:5550-5557.)。對于高致病力的、易變異的vvIBDV的防控，特別是突發(fā)疫情的防控，開展新型疫苗的快速構(gòu)建研究迫在眉睫。

馬立克氏病(MD)是由馬立克氏病病毒(MDV)引起的一種雞的傳染性腫瘤病，以淋巴組織增生和腫瘤形成為特征。馬立克氏病是雞的主要疾病之一，也是國內(nèi)外50年代以來最受重視的雞病。MDV屬于α-皰疹病毒亞科馬立克氏病樣病毒屬，是一種細胞結(jié)合性皰疹病毒，其基因組為線狀雙股DNA，約為180kb。MDV至少編碼103個蛋白質(zhì)，然而大多數(shù)蛋白仍未得到鑒定。MDV包括三種血清型，血清1型病毒具有致瘤性，可進一步分為幾個病理型，包括溫和型MDV(mMDV)、強毒型MDV(vMDV)、超強毒型MDV(vvMDV)及特超強毒型MDV(vv+MDV)病毒株。雞的非致瘤病毒分離株和火雞皰疹病毒分離株分別稱作血清2型和3型MDV。目前用于預(yù)防MD的疫苗主要是血清1型弱毒疫苗，常用的疫苗株有荷蘭的CVI988株和我國的814疫苗株。其中，814疫苗株性狀穩(wěn)定，是一株自然弱毒株，該疫苗株自從上世紀80年代研制成功以來，已安全使用30余年，沒有任何不良反應(yīng)。814疫苗株具有良好的免疫原性，保護效果與CVI988/Rispens株相當(dāng)。814疫苗株還是我國自主研制的，唯一有效應(yīng)用的、具有自主產(chǎn)權(quán)的MD疫苗。

IBDV和MDV的感染不僅可以造成感染雞的發(fā)病死亡，還可以引起顯著的免疫抑制，造成繼發(fā)感染和其他多種疫苗的免疫失敗。兩種病毒的混合感染造成的危害更加嚴重，也增加了防控的難度。疫苗是控制MD和IBD的主要手段，在種雞群、蛋雞群中MD疫苗是必須使用的疫苗，肉雞群中使用該疫苗可以較大幅度地提高養(yǎng)殖效率。目前用于預(yù)防IBD的疫苗主要是傳統(tǒng)活疫苗和滅活疫苗，但傳統(tǒng)疫苗不僅易于受到母源抗體的干擾，而且具有毒力返強和滅活不徹底的安全隱患。同時，現(xiàn)地IBD弱毒疫苗和中等毒力疫苗的廣泛使用不僅造成了雞群的免疫抑制，還加劇了病毒的變異，因此迫切需要研制更加安全有效的新型IBD疫苗?；钶d體疫苗誘導(dǎo)機體產(chǎn)生的免疫比較廣泛，可以同時表達多種抗原，制成多價或多聯(lián)疫苗，是當(dāng)今和未來疫苗研發(fā)的主要方向之一。而且，重組活載體疫苗由于不含有完整的目的病毒，因此相對傳統(tǒng)疫苗具有更好的安全性。