[發(fā)明專利]針對蜂蜜中MRJP1抗體對的制備方法、檢測方法及試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610146713.8
• 申請日: 2016-03-15
• 公開（公告）號: CN105693858A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發(fā)明（設計）人: 沈立榮;王一然;諶迪;張一帆;沈苗宏;辛曉璇
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/06;G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林松海

技術領域

本發(fā)明涉及蜂蜜成分含量的測定技術，尤其涉及一種蜂蜜所含的由蜜蜂封后分泌 的內源性蜂王漿主蛋白MRJP1特異性雙抗體的制備方法，及用雙抗體檢測摻假蜂蜜的雙抗 體夾心方法等。

背景技術

蜂蜜是蜜蜂工蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，與自身分泌物結合后，在巢脾中 經(jīng)充分釀造形成的天然甜物質。我國是蜂蜜生產(chǎn)和出口大國，2012年全國產(chǎn)量達到45.16萬 噸，占世界蜂蜜總產(chǎn)量的1/4；2013年出口蜂蜜12.5萬噸，占世界蜂蜜貿易量的1/4。根據(jù)中 華人民共和國供銷合作行業(yè)標準GH/T18796-2012《蜂蜜》對蜂蜜真實性的描述，“蜂蜜中不 得添加任何當前明確或不明確的添加物；如果在蜂蜜中添加其它物質,不應以’蜂蜜’或’ 蜜’作為產(chǎn)品名稱或名稱主詞；采用我國國家標準GB/T18932.1(2012)《蜂蜜中碳-4植物 糖含量測定方法穩(wěn)定碳同位素比率法》方法檢測，蜂蜜中的碳-4植物糖含量不得大于7。” 由于蜂蜜摻假成本低廉，檢測困難，不法商販容易牟利，已嚴重擾亂蜂蜜市場秩序，導致產(chǎn) 品信任度嚴重下降，導致行業(yè)整體價格和效益下降。目前市場上最常見的蜂蜜摻假方式是 加入果葡糖漿、玉米糖漿、甜菜糖漿等，尤其是用大米糖漿勾兌的假蜂蜜，其理化指標和風 味完全可以通過歐盟標準，難以檢測，嚴重影響了我國國際貿易聲譽。近年來，蜂蜜市場魚 龍混雜，摻假造假的事件不斷被曝出。2015年3月，在十二屆全國人大三次會議上，10名全國 人大代表提交了“嚴厲打擊假劣蜂產(chǎn)品的建議”。2015年7月，國家食品藥品監(jiān)督管理總局在 其官網(wǎng)正式作出回應：現(xiàn)行蜂蜜國家標準無法鑒別蜂蜜的真假，將積極推動蜂蜜食品安全 國家標準的修訂和蜂蜜摻假補充檢驗方法的建立。

為打擊摻假蜂蜜，多年來國內外開展了大量以摻假物質：來自于甘蔗和玉米等碳 四植物蔗糖和高果糖漿，來源于碳三植物的大米糖漿為指標的檢測方法研究。由于蜜蜂采 集的花粉來自于碳三植物，與甘蔗和玉米這兩類植物產(chǎn)生的糖中C13同位素的比例不一樣。 理論上可用碳四植物糖的同位素檢測方法確定蜂蜜的“真假”。但不同的蜂蜜差異實在太 大，C13同位素偏移的范圍也很大，很難準確判斷真假。有了碳四檢測法后，一些不良商家便 開始改為添加碳三糖，常見就是用碳三植物源的大米糖漿和甜菜糖漿，如果在蜂蜜中摻入 大米糖漿，碳四檢測方法就無能為力了。隨后發(fā)明了用高效液相色譜質譜聯(lián)用(LC-MS)儀來 檢測大米糖漿。但如果把大米糖漿水解轉化成葡萄糖和果糖，即便同時使用碳四檢測和LC- MS儀檢測，都無法辨別是否摻假。