[發(fā)明專利]針對蜂蜜中MRJP1抗體對的制備方法、檢測方法及試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610146713.8
• 申請日: 2016-03-15
• 公開（公告）號: CN105693858A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 沈立榮;王一然;諶迪;張一帆;沈苗宏;辛?xí)澡?/a>
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/06;G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 林松海

1.一種針對蜂蜜中內(nèi)源MRJP1抗體對的制備方法，其特征在于，所述的MRJP1的特異性 多肽M4的氨基酸序列為IKEALPHVPIFD，如SEQIDNO：1所示；所述的MRJP1的特異性多肽M5 的氨基酸序列為SGEYDYKNNYPSDID，如SEQIDNO：2所示；然后免疫新西蘭白兔。

2.一種針對蜂蜜中內(nèi)源MRJP1的免疫檢測方法，其特征在于，

1）利用MRJP1特異性多克隆抗體SP-1為捕獲抗體，MRJP1特異性多克隆抗體SP-2為檢測 抗體，以免疫雙抗夾心法測定待測蜂蜜中MRJP1含量；

所述的MRJP1特異性多克隆抗體SP-1通過利用MRJP1特異性多肽M4免疫新西蘭白兔得 到；所述的MRJP1特異性多肽M4的氨基酸序列為IKEALPHVPIFD，如SEQIDNO：1所示；

所述的MRJP1特異性多克隆抗體SP-2通過利用MRJP1特異性多肽M5免疫新西蘭白兔得 到，所述的MRJP1特異性多肽M5的氨基酸序列為SGEYDYKNNYPSDID，如SEQIDNO：2所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的免疫檢測方法，其特征在于，所述的免疫雙抗夾心法為ELISA 雙抗夾心法，按以下步驟進行處理：包被捕獲抗體SP-1，封閉，洗滌，加入抗原，加入酶標的 檢測抗體HRP-SP-2，洗滌，加顯色底物，加顯色終止液，用酶標儀測定樣品的吸光值450nm- 630nm。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的免疫檢測方法，其特征在于，所述的抗原為待測蜂蜜或已知蜜 源的純蜂蜜，通過比較待測蜂蜜和已知蜜源的純蜂蜜的MRJP1的吸光值判斷待測蜂蜜的質(zhì) 量。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的免疫檢測方法，其特征在于，所述的抗原為已知的不同濃度的 MRJP1，繪制以MRJP1濃度為橫坐標，以O(shè)D₄₅₀-OD₆₃₀為縱坐標的標準曲線，建立回歸方程；

所述的抗原為待測蜂蜜時，將獲得的吸光值，代入上述回歸方程，從而得到待測蜂蜜中 MRJP1的含量。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的免疫檢測方法，其特征在于，通過比較待測蜂蜜和已知蜜源的 純蜂蜜的MRJP1的含量判斷待測蜂蜜的質(zhì)量。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的免疫檢測方法，其特征在于，所述的MRJP1特異性多克隆抗體 SP-1、SP-2的效價均＞1:20000，酶標抗體HRP-SP-2的效價＞1:5000，以合成多肽M4、M5和 純化的MRJP1為抗原，經(jīng)ELISA測定。

8.一種采用如權(quán)利要求2所述的免疫檢測方法的試劑盒，其特征在于，主要包括MRJP1 特異性多克隆抗體SP-1、SP-2抗體對，其中以MRJP1特異性多克隆抗體SP-1為捕獲抗體， MRJP1特異性多克隆抗體SP-2為檢測抗體，以雙抗夾心法測定待測蜂蜜中MRJP1含量。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒為ELISA或者免疫層析試 紙條試劑盒。