[發明專利]一種單循環復制艾滋病毒樣顆粒及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201610145760.0
• 申請日: 2016-03-15
• 公開（公告）號: CN105754962A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 姚小劍;姚小剛;敖竹君;歐陽清檢
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12N7/04
• 分類號: C12N7/04;C07K16/10;A61K39/21;A61K49/00;A61P31/18
• 代理公司: 深圳市興科達知識產權代理有限公司 44260
• 代理人: 王翀

1.一種單循環復制艾滋病毒樣顆粒，其特征在于：由一個多基因缺失的HIV前病毒質粒、一個CMV-Gag/Pol表達質粒、一個Env表達質粒共轉染細胞后分離篩選獲得；所述多基因缺失的HIV前病毒質粒通過Gaussia螢光素酶基因序列替代nef基因序列進行標記后具有序列表中SEQIDNO.1所述的堿基序列。

2.根據權利要求1所述的一種單循環復制艾滋病毒樣顆粒，其特征在于：所述CMV-Gag/Pol表達質粒表達的蛋白含有病毒殼蛋白、逆轉錄酶和聚合酶。

3.根據權利要求2所述的一種單循環復制艾滋病毒樣顆粒，其特征在于：所述CMV-Gag/Pol表達質粒具有序列表中SEQIDNO.2所述的堿基序列。

4.根據權利要求1所述的一種單循環復制艾滋病毒樣顆粒，其特征在于：所述Env表達質粒具有序列表中SEQIDNO.3所述的堿基序列。

5.一種任一項權利要求1～4所述的單循環復制艾滋病毒樣顆粒的制備方法，其特征在于按以下步驟進行：將多基因缺失的HIV前病毒質粒、CMV-Gag/Pol表達質粒和Env表達質粒共轉染進離體人類細胞，各病毒蛋白在細胞內表達并在細胞表面組裝病毒并釋放到上清液中，然后對上清液進行超速離心，在細胞上清液中收集得到單循環復制艾滋病毒樣顆粒，即C-ΔRI/ΔE/Gluc。

6.根據權利要求5所述的單循環復制艾滋病毒樣顆粒的制備方法，其特征在于：所述離體人類細胞為293T細胞、293細胞、cos-7細胞、BHK細胞、NIH3T3細胞或Hela細胞或各種CD4+T細胞系。

7.一種任一項權利要求1～4中所述的單循環復制艾滋病毒樣顆粒在制備以免疫動物生產診斷和治療單克隆抗體的應用。

8.一種任一項權利要求1～4中所述的單循環復制艾滋病毒樣顆粒在制備作為樹突狀細胞的靶向疫苗中的應用。

9.一種任一項權利要求1～4中所述的單循環復制艾滋病毒樣顆粒在各種CD4+T細胞系包括人原代CD4+T細胞、人原代單核細胞、巨噬細胞體外感染研究中作為感染源的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于：所述病毒樣顆粒用于各種CD4+細胞系包括人原代CD4+T細胞、人原代單核細胞、巨噬細胞移植的裸鼠的感染研究中的作為感染源的應用，包括作為感染源用于檢測各種疫苗，抗病毒藥物或中和抗體體內有效性研究的質量檢測。