[發(fā)明專利]一種ES-2肽的季銨化殼寡糖修飾物及其制備方法與應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610144349.1
• 申請(qǐng)日: 2016-03-14
• 公開（公告）號(hào): CN105669857A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚海寧;王娟;張叢叢;劉純慧;于洋;孫鳳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/78
• 分類號(hào): C07K14/78;C07K1/107;A61K38/39;A61K47/48;A61P35/00;A61P9/10;A61P27/02;A61P19/02
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 張勇

本發(fā)明公開了一種ES?2肽的季銨化殼寡糖修飾物，由ES?2肽分子上的羧基與季銨化殼寡糖分子的氨基通過酰胺鍵結(jié)合，結(jié)構(gòu)式為：(ES?2)n?CO?NH?O?HTCC；式中，n＝1～10；ES?2的分子量為1223Da，等電點(diǎn)為10.42；O?HTCC的分子量為1000Da以上，自由氨基摩爾含量為不小于20％。本發(fā)明還公開了ES?2肽的季銨化殼寡糖修飾物的制備方法。本發(fā)明的ES?2肽的季銨化殼寡糖修飾物與ES?2相比，保留了ES?2分子抗新生血管生成活性和抗腫瘤活性，整合了O?HTCC的良好特性，使其具有穩(wěn)定性高、半衰期長(zhǎng)、細(xì)胞親和性強(qiáng)、靶向性強(qiáng)等的特性；與TMC相比，O?HTCC修飾ES?2的效率更高，因此具有更好的使用效果和應(yīng)用范圍。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種ES-2肽的季銨化殼寡糖修飾物及其制備方法與應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

內(nèi)皮抑素(Endostatin，ES)是一種內(nèi)源性的新生血管生成抑制因子，能夠有效地抑制新生血管的形成，從而切斷腫瘤的營(yíng)養(yǎng)供給途徑和廢物代謝途徑，起到抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的作用。ES-2肽(IVRRADRAAVP)是ES結(jié)構(gòu)中一個(gè)具有明顯抗新生血管生成、抗腫瘤活性的短肽段，更容易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，且更容易獲得和改造，但是同ES一樣，ES-2肽也存在體內(nèi)半衰期短和穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，這些缺點(diǎn)大大的限制了ES-2肽進(jìn)一步的應(yīng)用。

殼寡糖是目前發(fā)現(xiàn)的自然界存在的唯一一種陽(yáng)離子多糖，結(jié)構(gòu)明確且有靶向性，經(jīng)季銨化后能進(jìn)一步提高其帶正電荷的能力。

N,N,N-三甲基季銨化殼聚糖(TMC)制備過程中，殼寡糖的2-NH₂被甲基化后首先生成2-NH(CH₃)甚至2-N(CH₃)₂，然后才能進(jìn)一步形成2-N(CH₃)₃⁺季銨基團(tuán)，因此，水溶性良好的TMC中的自由氨基數(shù)量極少(一般<10％)，導(dǎo)致其對(duì)ES-2的結(jié)合效率較低、結(jié)合物活性保持率差，制約了季銨化殼寡糖對(duì)ES-2肽分子進(jìn)行化學(xué)修飾。

而且，由于ES-2短肽分子量較小，且等電點(diǎn)位10.42，屬于堿性蛋白，所以用同帶正電荷的季銨化殼寡糖對(duì)其進(jìn)行修飾的難度相較于對(duì)其他非堿性蛋白修飾的難度要大的多。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是提供一種ES-2肽的季銨化殼寡糖修飾物及其制備方法。

由于在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中，新生血管的生成會(huì)為腫瘤組織提供營(yíng)養(yǎng)并運(yùn)走廢物，因此如果抑制腫瘤引起的新生血管的生成，就可以起到“餓死腫瘤”的作用；在糖尿病等疾病過程中，新生血管的生成會(huì)導(dǎo)致出血等嚴(yán)重反應(yīng)，對(duì)于新生血管的生成的抑制可以明顯治療病人視網(wǎng)膜病變等并發(fā)癥。因此，本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供該ES-2肽的季銨化殼寡糖修飾物在制備抗新生血管生成和/或抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：

一種ES-2肽的季銨化殼寡糖修飾物，由ES-2肽分子上的羧基與季銨化殼寡糖(O-HTCC)分子的氨基通過酰胺鍵結(jié)合，結(jié)構(gòu)式如下：

(ES-2)n-CO-NH-O-HTCC；

式中，n＝1～10；ES-2的分子量為1223Da，等電點(diǎn)為10.42；O-HTCC的分子量為1000Da以上，自由氨基摩爾含量為不小于20％。

優(yōu)選的，所述n＝1～5，即一分子O-HTCC與1～5分子ES-2共價(jià)結(jié)合形成修飾物；O-HTCC的分子量為1000Da～10000Da，自由氨基摩爾含量為不小于50％。