[發明專利]一種ES-2肽的季銨化殼寡糖修飾物及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201610144349.1
• 申請日: 2016-03-14
• 公開（公告）號: CN105669857A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 譚海寧;王娟;張叢叢;劉純慧;于洋;孫鳳
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C07K1/107;A61K38/39;A61K47/48;A61P35/00;A61P9/10;A61P27/02;A61P19/02
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 張勇

1.一種ES-2肽的季銨化殼寡糖修飾物的制備方法，其特征在于，步驟為：

(1)向ES-2肽溶液中加入EDC和NHS進行羧基活化，ES-2肽與EDC的摩爾比為1∶(10～50)，EDC與NHS的摩爾比為3：(0.2～2)，室溫下攪拌且避光反應30min，所述ES-2肽序列為IVRRADRAAVP；

(2)將步驟(1)反應后的溶液加入到季銨化殼寡糖溶液中，使ES-2肽與季銨化殼寡糖的質量比為1：(0.5～5)，震蕩反應6h，得粗品，經分離純化，即得ES-2肽的季銨化殼寡糖修飾物。

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述ES-2肽溶液的pH為5.0，其中ES-2肽的濃度為0.5～5mg/ml。

3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述季銨化殼寡糖溶液的pH為8.0，其中季銨化殼寡糖的濃度為1～5mg/ml。

4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述分離純化的具體方法為：采用SephadexG-25或Sephadex30凝膠層析柱進行分離純化；用pH為6.0，濃度25mmol/L磷酸鹽緩沖液進行線性洗脫，流速1.0ml/min，檢測波長254nm，收集洗脫峰組分。

5.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述季銨化殼寡糖的制備方法為：將殼寡糖溶于醋酸水溶液中，加入乙醇，室溫攪拌，充分溶脹后加入苯甲醛，制得乳白色膠狀反應液；將上述乳白色膠狀反應液干燥后研磨，加入異丙醇、2,3-環氧丙基三甲基氯化銨進行反應，反應液經過濾、洗滌、干燥后，再加入鹽酸乙醇溶液進行反應，經沉淀、干燥后得季銨化殼寡糖粗品；上述季銨化殼寡糖粗品溶于水中，采用截留分子量為100～500D透析袋中透析48h，去除小分子雜質，透析液冷凍干燥，制得季銨化殼寡糖。

6.權利要求1-5任一項所述ES-2肽的季銨化殼寡糖修飾物的制備方法得到的ES-2肽的季銨化殼寡糖修飾物。

7.權利要求6所述的ES-2肽的季銨化殼寡糖修飾物在制備伴隨新生血管生成疾病的治療藥物和/或抗腫瘤藥物中的應用。

8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述伴隨新生血管生成疾病包括糖尿病視網膜病變、老年性黃斑病變或關節炎。