[發明專利]一種高活力漆酶液的制備方法

有效

• 申請號: 201610143931.6
• 申請日: 2016-03-14
• 公開（公告）號: CN105647881B
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 李松;湯斌;唐海;陳阿娜;劉宇;楊倩
• 申請（專利權）人: 安徽工程大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12R1/645
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 楊紅梅

1.一種高活力漆酶液的制備方法，包括如下步驟：

步驟一，使用固體斜面活化栓菌以制備斜面種子；所述栓菌保藏編號為：CCTCC NO：M2015191；

步驟二，將斜面種子在種子培養基中接種培養以制備種子培養液；所述種子培養基包括一級種子培養基和二級種子培養基，所述斜面種子先接種入一級種子培養基進行液體搖瓶培養得一級種子培養液，再將一級種子培養液接種入二級種子培養基在發酵罐中進行種子液擴大培養得二級種子培養液；制備所述二級種子培養液的發酵罐發酵工藝參數為：終裝料系數為70~80%，罐壓設定為0.03-0.06MPa，溫度控制為28~30℃，攪拌轉速控制在300~500 r/min之間，通氣量控制在0.3~0.6 vvm之間，溶解氧濃度控制在30%~50%之間；

步驟三，將種子培養液在發酵培養基中進行發酵產漆酶；

步驟三中發酵的工藝參數為：罐壓設定為0.03~0.08 MPa，溫度控制為28~30℃，攪拌轉速控制在300~700 r/min之間，通氣量控制在0.3~0.8 vvm之間，溶解氧濃度控制在20%~60%之間。

2.根據權利要求1所述高活力漆酶液的制備方法，其特征在于：所述二級種子培養基的配方為：每L二級種子培養基含有：葡萄糖10 g，10%麩皮浸出汁100 g，氯化銨5 g，酵母粉2g，五水硫酸銅0.1 g，氯化鈉1 g，磷酸二氫鉀1 g。

3.根據權利要求1所述高活力漆酶液的制備方法，其特征在于：步驟二和步驟三的發酵過程中控制pH =4~6。

4.根據權利要求1所述高活力漆酶液的制備方法，其特征在于：所述步驟三中發酵培養基的配方為：每L含有麥芽糖、葡萄糖之一或其混合物10~40 g，10%麩皮浸出汁80~120g，氯化銨、酒石酸銨、豆粕、豆餅粉之一或其混合物5~10 g，酵母粉、蛋白胨之一或其混合物2.5g，五水硫酸銅0.1~0.4 g，氯化鈉1 g，磷酸二氫鉀2 g。

5.根據權利要求1所述高活力漆酶液的制備方法，其特征在于：所述步驟三中還包括在發酵過程中添加營養液。

6.根據權利要求5所述高活力漆酶液的制備方法，其特征在于：所述營養液的配方為：每L含有麥芽糖、葡萄糖、蔗糖之一或其混合物300~450 g，五水硫酸銅0~20 g，硝酸銨、硝酸鉀或其混合物50~100 g，吐溫-80 2~5g。