[發明專利]用于測定大豆疫霉菌無毒基因Avr3a對鑒別寄主L83-570致病性的分子方法

有效

• 申請號: 201610143784.2
• 申請日: 2016-03-14
• 公開（公告）號: CN105671173B
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發明（設計）人: 崔林開;胡艷紅;周洲;李永麗;鄭偉
• 申請（專利權）人: 河南科技大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 張燕

本發明涉及用于測定大豆疫霉菌無毒基因Avr3a對鑒別寄主L83?570致病性的分子方法，提取待檢測大豆疫霉菌的基因組DNA；PCR擴增出包括完整無毒基因Avr3a的DNA片段；用限制性內切酶BmgBI酶切擴增出的DNA片段；對酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳，瓊脂糖凝膠電泳圖在250bp?500bp范圍內有2條DNA條帶，則對應的待檢測大豆疫霉菌菌株對鑒別寄主L83?570表現為不致病，酶切后在750bp以下有1條DNA條帶，則對應的待檢測大豆疫霉菌菌株對鑒別寄主L83?570表現為致病。該方法測定周期短、無中間類型，可同時測定多株大豆疫霉菌無毒基因Avr3a對鑒別寄主L83?570的致病性。

技術領域

本發明涉及涉及一種分子測定方法，尤其涉及用于測定大豆疫霉菌無毒基因Avr3a對鑒別寄主L83-570致病性的分子方法。

背景技術

大豆疫霉菌侵染大豆引起的大豆根腐病是世界范圍內威脅大豆生產的主要病害之一。大豆根腐病于1948年在美國的印地安那州首次被發現，而后在大豆的主要生產國都相繼發現了該病害。我國1989年由沈崇堯和蘇彥純首次在東北大豆主產區分離到大豆疫霉菌，之后在黑龍江省、吉林省和北京市也相繼發現有大豆疫霉菌，近幾年山東、安徽、河南、江蘇、浙江、內蒙古、湖北、福建、新疆、四川、天津和貴州等15個省(市區)也相繼被報道分離鑒定到大豆疫霉菌。其中在黑龍江和福建兩省發生較為嚴重，目前仍是我國重要的對外檢疫對象。

大豆疫霉菌的進化速度較快，生理小種分化十分復雜，美國目前已鑒定到55個生理小種和更多未正式定名生理小種的致病型；我國已發現1號、3號、8號、9號、11號、15號、17號、21號、24號等10個生理小種，其中1號生理小種為黑龍江省的優勢小種，同時也鑒定到大量的未定名生理小種的致病型。

目前防治大豆疫霉根腐病最有效的方法是種植抗病品種，而想要準確使用大豆抗病品種就需要明確待檢測大豆疫霉菌(指定地區分離的大豆疫霉菌)的毒性組成(即生理小種的組成)；而目前生理小種的測定主要采用帶有14個抗病基因(Rps1a,Rps1b,Rps1c,Rps1d,Rps1k,Rps2,Rps3a,Rps3b,Rps3c,Rps4,Rps5,Rps6,Rps7和Rps8)的一套近等基因系鑒別寄主進行下胚軸創傷接種測定，該方法雖然簡單易行，但測定周期長、工作強度大、容易出現中間類型，不適合高通量的生理小種鑒定；因此尋求一種能夠快速、準確、高通量測定大豆疫霉菌毒性組成的方法是本領域亟待解決的技術問題。

與本發明相關的公知常識：公知常識(1)：病原菌攜帶有無毒基因或毒性基因，鑒別寄主攜帶有抗病基因或感病基因，其中無毒基因與毒性基因是一對等位基因，抗病基因和感病基因是一對等位基因；當攜帶有無毒基因的病原菌侵染攜帶有對應抗病基因的鑒別寄主時，抗病基因與無毒基因互作使鑒別寄主表現為抗病；當攜帶有無毒基因的病原菌侵染攜帶有感病基因的鑒別寄主時，鑒別寄主表現為感病；當攜帶有毒性基因的病原菌侵染鑒別寄主時，不管鑒別寄主是否攜帶有抗病基因，均表現為感病。公知常識(2)：對于無毒基因與抗病基因的命名，國際上通常是先命名無毒基因，并將能與無毒基因互作使鑒別寄主表現為抗病的基因命名為對應的抗病基因；即理論上可能會存在多個抗病基因與同一個無毒基因互作的情況，而實際上也確實如此，例如國際上最初認為大豆疫霉中的無毒基因Avr4和Avr6分別與大豆中的抗病基因Rps4和Rps6互作，但進一步的研究發現Avr4和Avr6實際上是同一個基因，改名為Avr4/6，抗病基因Rps4和Rps6均能與無毒基因Avr4/6互作，分別識別無毒基因Avr4/6的不同部位來引發抗病反應，由公知常識(2)分析，理論上可能會存在多個抗病基因與無毒基因Avr3a互作，即來源于不同抗病材料的抗病基因Rps3a可能是完全不同的抗病基因。

發明內容